Sammenligning av konfokalmikroskop og vanlig optisk mikroskop
Mikroskop er hovedverktøyet for å observere celler. Avhengig av lyskilden kan den deles inn i to kategorier: optisk mikroskop og elektronmikroskop. Førstnevnte bruker synlig lys (ultrafiolett mikroskop til ultrafiolett lys) som lyskilde, mens sistnevnte bruker en elektronstråle som lyskilde. Vanlig optisk mikroskop og laserkonfokalmikroskop tilhører det samme optiske mikroskopet.
I. Generelt optisk mikroskop
Vanlig biologisk mikroskop består av tre deler, nemlig: ① belysningssystem, inkludert lyskilde og kondensator; ② optisk forstørrelsessystem, bestående av objektiver og okularer, er hoveddelen av mikroskopet, for å eliminere sfærisk aberrasjon og kromatisk aberrasjon, er okularene og objektivene sammensatt av en kompleks linsegruppe; ③ mekanisk enhet, brukes til å fikse materialet og observasjon av bekvemmelighet.
Mikroskopobjektet er klart ikke bare bestemt av forstørrelsen, men også med mikroskopets oppløsningsevne (oppløsning), refererer oppløsningsevnen til mikroskopet (eller det menneskelige øyet fra målet 25cm) kan skille objektet zui små intervaller av evnen til å skille størrelsen på oppløsningskraften bestemmes av bølgelengden til lyset og speilmunnhastigheten og brytningsindeksen til mediet, uttrykt i formelen:
R=0.61λ /NANA=nsin /2 hvor: n=brytningsindeksen til mediet;=speilmunningsvinkelen (prøve på objektivlinsens munning av spenningsvinkelen), NA=speilmunningshastighet (numerisk blenderåpning). Vinkelen på speilets munning skal alltid være mindre enn 180?, så zui-verdien til sina/2 er nødvendigvis mindre enn 1.
Brytningsindeksen til glass som brukes i produksjonen av optiske linser er 1,65 ~ 1,78, brytningsindeksen til mediet som brukes jo nærmere glasset, jo bedre. For tørr objektivlinse er medium for luft, speilmunnhastighet vanligvis 0.05 ~ 0,95; oljelinse med sedertreolje som middels, speilmunnhastigheten kan være nær 1,5.
Vanlig lysbølgelengde på 400~700nm, så mikroskopets oppløsningskraftverdi vil ikke være mindre enn 0,2μm, det menneskelige øyets oppløsningsevne er 0,2mm, så den generelle utformingen av mikroskopet zui forstørrelse er vanligvis 1000X.
For det andre, laserkonfokalt skanningsmikroskop
Laser konfokalt skanningsmikroskop (laser konfokalt skanningsmikroskop), med en laser som skanningslyskilde, punkt for punkt, linje for linje, overflate for overflate rask skanningsavbildning, skanningslaser og fluorescenssamling av et felles objektiv, objektiv skanningslaserfokuspunkt , men også øyeblikkelig avbildning av objektpunktet. På grunn av den kortere bølgelengden til laserstrålen er strålen veldig fin, så det konfokale laserskanningsmikroskopet har en høy oppløsning, omtrent 3 ganger så stor som et vanlig optisk mikroskop. Systemet er fokusert én gang og skanningen er begrenset til ett plan av prøven. Når fokuseringsdybden ikke er den samme, kan bildene av forskjellige dybdenivåer av prøven oppnås, og denne bildeinformasjonen lagres i datamaskinen, gjennom dataanalyse og simulering, kan den vise den tredimensjonale strukturen til celleprøven .
