Feilsøkingsmetoder og trinn for fasekontrastmikroskopi
en. På grunnlag av justering av Kuhler-lyssystemet, bruk lysfeltmetoden for å fokusere prøven tydelig;
b. Vri spotlighten til Ph1 og juster den med skalalinjen på platespilleren. Velg et 10 x fasekontrastobjektiv og erstatt det med den gjennomsiktige prøven som skal observeres;
c. Fjern et av okularene, erstatt det med et sentreringsteleskop, og fokuser på de to kontrastringene i synsfeltet (den svarte kontrastringen til objektivlinsen og transmittanskontrastringen til kondensatorlinsen);
d. De to forskjellsringene i synsfeltet er kanskje ikke nødvendigvis sammenfallende. Juster de to justeringsenhetene på spotlighten (juster venstre og høyre posisjon av forskjellsringene med justeringsstenger og friksjonsknapper for justering av front- og bakposisjon), slik at den gjennomsiktige ringen beveger seg frem og tilbake for å falle sammen med den svarte ringen ;
e. Etter justering, bytt tilbake til observasjonsokularet og trykk det grønne filteret inn i den optiske banen for å observere faseforskjellbildet til prøven;
f. Når du observerer med 20 x og 40 x objektiver, bør spotlighten stilles i posisjon Ph2, og når du bruker en 100 x objektivlinse, bør spotlighten stilles i posisjon Ph3.
Anvendelsesområde: Egnet for å observere gjennomsiktige, ufargede eller ufargede prøver, som ulike celler, levende vev, ufargede eller ufargede vevsskiver, vannlevende organismer, etc.
Det grunnleggende prinsippet for fasekontrastmikroskop
Når lys passerer gjennom en relativt gjennomsiktig prøve, er det ingen signifikant endring i lysets bølgelengde (farge) og amplitude (lysstyrke). Derfor, når man observerer ufargede prøver (som levende celler) under et vanlig optisk mikroskop, er deres morfologi og indre struktur ofte vanskelig å skille. På grunn av forskjellene i brytningsindeks og tykkelse på forskjellige deler av cellen, vil det imidlertid være forskjeller i den optiske banen til direkte og diffraktert lys når den passerer gjennom denne prøven. Når den optiske banen øker eller reduseres, vil fasen av akselererende eller etterslepende lysbølger endres (som resulterer i faseforskjell). Faseforskjellen til lys kan ikke føles med det blotte øye, men faseforskjellsmikroskopet kan bruke sin spesielle enhet - en sirkulær blenderåpning og en faseplate, og bruke interferensfenomenet lys til å transformere lysets faseforskjell til en amplitudeforskjell (lys og mørk forskjell) som kan oppdages av det menneskelige øyet. Dette gjør at det opprinnelig gjennomsiktige objektet viser tydelige lys- og mørkeforskjeller, øker kontrasten og lar oss tydelig observere levende celler og visse fine strukturer inne i celler som ikke kan sees eller tydelig ses under vanlige optiske mikroskoper og mørkefeltsmikroskoper.
Bildeprinsippet til et fasekontrastmikroskop: Den optiske kilden kan bare passere gjennom en gjennomsiktig ring med en sirkulær blenderåpning, som deretter fokuseres til en lysstråle. Når denne lysstrålen passerer gjennom objektet som testes, gjennomgår den varierende grader av avvik (diffraksjon) på grunn av de forskjellige optiske banene til hver del. På grunn av det faktum at bildet dannet av den gjennomsiktige ringen sammenfaller med den konjugerte overflaten på faseplaten og fokalplanet bak objektivlinsen. Derfor passerer direkte lys som ikke har avviket gjennom den konjugerte overflaten, mens diffraktert lys som har avviket passerer gjennom den kompenserende overflaten. På grunn av de ulike egenskapene til konjugatoverflaten og kompensasjonsflaten på faseplaten, vil de generere henholdsvis en viss faseforskjell og intensitetsreduksjon av lyset som passerer gjennom disse to delene. De to settene med lys vil da konvergere gjennom den bakre linsen og bevege seg på den samme optiske banen, og forårsake interferens mellom direkte og diffraktert lys, og endre faseforskjellen til amplitudeforskjell. På denne måten, under fasekontrastmikroskopi, omdannes faseforskjellen som ikke kan skjelnes av det menneskelige øyet til en amplitudeforskjell (lysstyrkeforskjell) som kan skilles fra det menneskelige øyet gjennom lyset fra en fargeløs gjennomsiktig kropp.
