Bestemmelse av antall mikroorganismer-Mikroskopisk direkte tellemetode!
Bakteriell populasjonsvekst manifesteres ved en økning i celleantall eller en økning i cellemateriale. Metoder for å bestemme antall celler inkluderer direkte mikroskopisk telling, platetelling, turbiditetsberegning med spektrofotometer, mest sannsynlig antall MPN og membranfiltrering. (membranfiltrering) etc. Metoder for måling av cellulære stoffer inkluderer bestemmelse av celletørrvekt, bestemmelse av visse cellekomponenter som nitrogeninnhold, RNA- og DNA-innhold, og bestemmelse av metabolittprodukter. Kort fortalt er det mange metoder for å måle mikrobiell vekst, hver med sine fordeler og ulemper. Metoden bør velges i henhold til de spesifikke kravene til arbeidet. Dette eksperimentet introduserer hovedsakelig mikroskop-direktetellingsmetoden som vanligvis brukes i produksjon og vitenskapelig forskningsarbeid.
1. Formålskrav
1. Tydeliggjør prinsippet for telling med blodcelletellebrett.
2. Beherske metoden for å telle mikroorganismer ved hjelp av et blodcelle-tellebrett.
2. Grunnleggende prinsipper
Mikroskop direkte tellemetode er en enkel, rask og intuitiv metode som plasserer en liten mengde suspensjon av prøven som skal testes på et spesielt objektglass med et bestemt areal og volum (også kalt et bakteriometer) og teller det direkte under et mikroskop. Metoder. For tiden inkluderer vanlig brukte bakteriometre i inn- og utland: hemocytometer, Peteroff-Hauser bakteriometer og Hawksley bakteriometer, etc. De kan alle brukes til å telle gjær, bakterier, muggsporer og andre suspensjoner, og de grunnleggende prinsippene er de samme. De to sistnevnte bakterietellerne har et totalt volum på 0.02 mm3 etter å ha blitt dekket med et dekkglass, og avstanden mellom dekkglasset og objektglasset er bare 0,02 mm. Derfor kan en oljenedsenkingsobjektivlinse brukes til å observere og oppdage mindre celler som bakterier. telle. I tillegg til å bruke disse bakteriometrene, er det også en estimeringsmetode som direkte observerer forholdet mellom smøreområdet og synsfeltområdet under et mikroskop. Denne metoden brukes vanligvis til bakteriologisk undersøkelse av melk. Fordelene med mikroskopets direkte tellemetode er at den er intuitiv, rask og enkel å betjene. Ulempen med denne metoden er imidlertid at det målte resultatet vanligvis er summen av døde bakterier og levende bakterier. Det er for tiden noen metoder for å overvinne denne mangelen, for eksempel å kombinere levedyktige bakterier som farger mikrokammerkultur (kort tid) og legge til celledelingshemmere for å oppnå formålet med å telle bare levedyktige bakterier.
Dette eksperimentet bruker et hemocytometer som et eksempel for å utføre direkte telling under et mikroskop. For bruk av de to andre bakteriometrene, se instruksjonene til hver produsent. Direkte telling under et mikroskop ved hjelp av et hemocytometer er en vanlig mikrobiell opptellingsmetode. Tellebrettet er et spesielt lysbilde med fire spor som danner tre plattformer; den bredere plattformen i midten er delt i to halvdeler av et kort horisontalt spor, og det er et rutenett på hver side av plattformen. Hvert rutenett er delt inn i ni store ruter, og den store firkanten i midten er tellerom. Strukturen til blodcelletelleren er vist i figur {{0}}. Det er generelt to spesifikasjoner for skalaen til tellekammeret. Den ene er en stor firkant delt inn i 25 mellomstore firkanter, og hver mellomstore firkant er delt inn i 16 små firkanter (Figur 15-2); den andre er en stor firkant. Det firkantede rutenettet er delt inn i 16 mellomstore ruter, og hver mellomstore rute er delt inn i 25 små ruter. Uansett hva slags tellebrett det er, er det 400 små ruter i hver stor rute. Sidelengden til hver stor firkant er lmm, deretter er arealet av hver stor firkant lmm2. Etter at dekkglasset er dekket, er høyden mellom dekkglasset og objektglasset 0,lmm, så volumet til tellekammeret er 0,lmm3 (en ti tusendels milliliter). Figur 15-1 Strukturen til tellebrettet for blodceller (1) Figur 15-2 Strukturen til tellebrettet for blodceller (2) A. Sett forfra; B. Lengdesnitt; forstørret firkantet rutenett, den store firkanten i midten er tellekammeret 1. Blodceller Tellebrett; 2. Dekkglass; 3. Når du teller i tellekammeret, teller du vanligvis totalt antall bakterier i fem ruter, finn deretter gjennomsnittsverdien av hver rute, og multipliser med 25 eller 16 for å få Totalt antall bakterier i en stor firkant konverteres så inn i det totale antallet bakterier i 1 ml bakterieoppløsning. Anta at det totale antallet bakterier i de fem midterste rutene er A, og fortynningsfaktoren til bakterieløsningen er B. Hvis det er en telleplate med 25 midterste ruter, så er det totale antallet bakterier i 1mL av bakterieløsningen {{ 23}} A/5×25×104× B=50000A·B (stykker) På samme måte, hvis det er en telleplate med 16 kvadrater, er det totale antallet bakterier i 1mL bakterieoppløsning {{ 30}}A/5×16×104×B=32000A·B (stykker),,
