Direkte telling med mikroskop for mikrober
Eksperimentelt prinsipp
Direkte telling under et mikroskop ved hjelp av et hemocytometer er en vanlig mikrobiell tellemetode. Fordelen med denne metoden er at den er intuitiv og rask. Plasser den passende fortynnede bakteriesuspensjonen (eller sporesuspensjonen) i tellekammeret mellom objektglasset og dekkglasset til hemocytometeret, og tell under mikroskopet. Siden volumet til tellekammeret er fast (0,1 mm2), kan det konverteres til totalt antall mikroorganismer per volumenhet i henhold til antall mikroorganismer observert under mikroskopet. Fordi denne metoden teller summen av levende og døde bakterier, kalles den også den totale bakterietellingsmetoden.
Et hemocytometer er vanligvis et spesielt glassglass der fire riller danner tre plattformer. Plattformen i midten er delt i to halvdeler av et kort horisontalt spor. Et rutenett er gravert på plattformen på hver side. Hvert rutenett er delt inn i ni store firkanter. Den store firkanten i midten er tellerommet. Mikroorganismer telles i tellekammeret. Strukturen til blodcelletelleren er vist i figur Ⅷ-1.
Skalaen til tellerommet har generelt to spesifikasjoner, den ene er at en stor firkant er delt inn i 16 midterste ruter, og hver midterste rute er delt inn i 25 små firkanter (Figur Ⅷ-2); den andre er en stor firkant Firkanten er delt inn i 25 midterste firkanter, og hver midterste firkant er delt inn i 16 små firkanter (Figur Ⅷ-1, C). Men uansett hva slags tellebrett det er, er antallet små ruter i hver store rute det samme, det vil si 16×25=400 små ruter, som vist i figur Ⅷ-2.
Sidelengden til hver stor firkant er 1 mm, og arealet til hver stor firkant er 1 mm2. Etter at dekkglasset er dekket, er høyden mellom lysbildeglasset og dekkglasset 0,1 mm, så volumet til tellekammeret er 0,1 mm3.
Når du teller, teller du vanligvis det totale antallet bakterier i de fem midterste rutene, får deretter gjennomsnittsverdien for hver midterste firkant, og multipliserer deretter med 16 eller 25 for å få det totale antallet bakterier i en stor firkant, og deretter konvertert til totalt antall bakterier i 1 ml bakterieløsning.
Laboratorieutstyr
Hemocytometer, mikroskop, dekkglass, steril kapillær;
Eksperimentelle materialer
Saccharomyces cerevisiae suspensjon
Eksperimentell prosedyre (mikrobielt mikroskop direkte tellemetode)
1. fortynning
Fortynn Saccharomyces cerevisiae-suspensjonen riktig. Hvis bakterieløsningen ikke er tykk, trenger den ikke fortynnes.
2. Mikroskopisk tellerom
Før du legger til prøver, utfør en mikroskopisk inspeksjon av tellekammeret på telleplaten. Hvis det er skitt, må det renses før telling.
3. legg til prøve
Dekk den rene og tørre hemocytometerplaten med et dekkglass, og bruk deretter en steril dråpe med fin munn for å slippe en liten dråpe av den fortynnede Saccharomyces cerevisiae-løsningen fra kanten av dekkglasset (ikke for mye), slik at bakterieoppløsningen er nær gapet langs gapet. Kapillær osmose kommer inn i tellekammeret av seg selv, og det generelle tellekammeret kan fylles med bakterievæske. Vær forsiktig så du ikke har luftbobler.
4. mikroskoptelling
Etter å ha hvilet i 5 minutter, plasser hemocytometeret på scenen til mikroskopet, bruk først en laveffektlinse for å finne plasseringen av tellekammeret, og bytt deretter til en høyeffektlinse for telling. Hvis det viser seg at bakterieløsningen er for tykk eller for tynn før telling, er det nødvendig å justere fortynningen på nytt før telling. Vanligvis krever prøvefortynningen omtrent 5-10 bakterier i hver celle. Hvert tellekammer velger bakteriene i 5 midterste rutenett (valgfritt 4 hjørner og sentrale rutenett) for telling. Bakteriene på rutenettet telles vanligvis kun på øvre og høyre linje. Ved gjærspirer, når størrelsen på knoppkroppen når halvparten av modercellen, tell to bakterier. Tell en prøve for å beregne bakterieinnholdet i prøven fra verdiene telt i de to tellekamrene.
5. Rengjøring av hemocytometeret
Etter bruk, skyll blodcelletelleplaten på kranen med vannstråler, ikke vask den med harde gjenstander, og tørk den selv eller med hårføner etter vask. Mikroskopisk undersøkelse, observer om det er rester av bakterier eller andre sedimenter i hver celle. Hvis det ikke er rent, må det vaskes gjentatte ganger til det er rent.
