Bildemetoder for lyst-felt og mørkt-felt i fluorescensmikroskopi
(1) Bright field imaging (BFI) metode, som bare lar den overførte elektronstrålen i det paraksiale området passere gjennom objektivåpningen, og danner et mørkt bilde på en lys bakgrunn. Jo mindre blenderåpningen til objektivåpningen er, desto større er kontrasten til det lyse feltbildet; (2) Dark field imaging (DFI) er en teknikk som lar bare en del av den spredte strålen med stor vinkel eller en viss diffraksjonsstråle av krystallen passere gjennom objektivåpningen, mens den blokkerer den transmitterte strålen. Dette danner et lyst grafisk bilde på en mørk bakgrunn. Denne mørkefeltsavbildningsmetoden kan forbedre kontrasten til bilder og er en viktig bildeteknikk.
Det er omtrent fire metoder for å oppnå mørkefeltsbilder ved bruk av Leica fluorescensmikroskoper: (1) opprettholde vertikal belysning langs den optiske aksen mens du flytter objektivåpningen; (2) Bruken av skrå belysning for å fange opp spredte stråler i retning av den optiske aksen kalles Central Dark Field Imaging (CDFI); (3) En objektivåpning med en sentral strålestopper og et sirkulært gjennomsiktig område; (4) Bruk en sirkulær gjennomsiktig kondensatorlinse for lysregistrering og en sentral sirkulær blenderåpning for objektivlinsen. *-metoden her er den enkleste, men den bruker elektronisk bildebehandling i det distale ermeområdet, så aberrasjonen er stor og bildekvaliteten er ikke særlig god. Den andre metoden kan unngå de ovennevnte ulempene, men Leica fluorescensmikroskopets objektive blenderåpning mottar bare en liten del av spredte diffrakterte elektroner, noe som resulterer i lavere effektivitet. Siden av blenderåpningen blir ofte utsatt for store mengder elektronbombardement, noe som lett kan forårsake asymmetrisk forurensning og påvirke bildekvaliteten. Den ringformede objektivlinsen har blitt forbedret i dette aspektet, men ulempen er at den er vanskelig å produsere og det er vanskelig å oppnå fullstendig aksial symmetri. Gitt de relativt avslappede kravene til belysningssystemet, kan sistnevnte løsning tas i bruk, som innebærer å legge til en ringformet åpning ved kondensatoren for å gi hulstrålebelysning for prøven. Effekten av denne enheten. Bildeoppløsningen kan være nær oppløsningen til lyse feltbilder, mens kontrasten er kraftig forbedret.
