Måling av mikrobiell mengde - mikroskopisk direkte tellemetode!
Veksten av bakteriepopulasjoner er preget av en økning i antall celler eller en økning i cellemateriale. Det finnes flere metoder for å måle celletall, inkludert direkte mikroskopisk telling, platetelling, turbometri ved spektrofotometer, mest sannsynlig antall MPN og membranfiltrering. Metodene for å måle cellulære stoffer inkluderer måling av celletørrvekt, måling av innhold av visse komponenter i celler som nitrogen, RNA og DNA, og måling av metabolske produkter. Oppsummert er det mange metoder for å måle mikrobiell vekst, hver med sine fordeler og ulemper, og utvalget bør baseres på spesifikke krav i arbeidet. Dette eksperimentet introduserer hovedsakelig den vanlig brukte mikroskop-direktetellingsmetoden i produksjon og vitenskapelig forskningsarbeid.
Formålskrav
1. Tydeliggjør prinsippet om bruk av blodcelletellebrett for telling.
2. Mestre metoden med å bruke et blodcelletellebrett for mikrobiell telling.
2, Grunnleggende prinsipper
Mikroskopisk direkte tellemetode er en enkel, rask og intuitiv metode for direkte å telle en liten mengde suspensjon av en prøve under et mikroskop ved å plassere den på et spesielt glassglass med et visst område og volum (også kjent som en bakterieteller). For tiden inkluderer ofte brukte bakterietelleapparater i inn- og utland blodcelletelleplater, Peteroff Hauser bakterietelleapparater og Hawksley bakterietelleapparater, som alle kan brukes til å telle suspensjoner av gjær, bakterier, soppsporer, etc., med samme grunnprinsipp. De to sistnevnte typene bakterietellere har et totalt volum på {{0}},02 mm3 etter å ha blitt dekket med et dekkglass, og avstanden mellom dekkglasset og bæreglasset er kun 0,02 mm. Derfor kan et oljenedsenkingsmål brukes til å observere og telle mindre celler som bakterier. I tillegg til å bruke disse bakterietellerne, finnes det også en estimeringsmetode for direkte å observere forholdet mellom smøreareal og feltareal under mikroskop, som vanligvis brukes til bakteriologisk undersøkelse av melk. Fordelene med direkte telling med mikroskop er intuitive, raske og enkle å betjene. Men ulempen med denne metoden er at de målte resultatene vanligvis er summen av døde og levende celler. For tiden er det noen metoder som kan overvinne denne ulempen, for eksempel å kombinere levende cellefargingskammerkultur (kort tid) og legge til celledelingshemmere for å oppnå målet om kun å telle levende celler.
Bruke et blodcelletellebrett som eksempel for direkte telling under mikroskop. Bruksmetodene til de to andre bakterietellerne finnes i manualene til forskjellige produsenter. Direkte telling under et mikroskop ved hjelp av en blodcelletelleplate er en vanlig metode for mikrobiell telling. Tellebrettet er en spesiallaget glassrute med fire riller som danner tre plattformer på den; Den bredere plattformen i midten er delt i to halvdeler av et kort horisontalt spor, og det er et rutenett på hver side av plattformen. Hvert rutenett er delt inn i ni store rutenett, og det store rutenettet i midten er tellerom. Strukturen til blodcelletelleplaten er vist i figur l{{0}}. Målerommet til tellerommet har generelt to spesifikasjoner. Den ene er at en stor firkant er delt inn i 25 midterste ruter, og hver rute er videre delt inn i 16 små ruter (Figur 15-2); En annen metode er å dele en stor firkant i 16 midterste ruter, og hver rute er videre delt inn i 25 små ruter. Uansett størrelsen på tellebrettet er det imidlertid 400 små ruter i hver stor rute. Hvis sidelengden til hver rute er 1 mm, er arealet av hver stor firkant lmm2. Etter tildekking med dekkglass er høyden mellom dekkglasset og objektglasset 0,1 mm, så volumet til tellerommet er 0,1 mm3 (en tusendels milliliter). Figur 15-1 Strukturen til tellebrettet for blodceller (I) Figur 15-2 Oppbygningen av tellebrettet for blodceller (II) Et sett forfra; B. Vertikal snitt; Det forstørrede rutenettet har en stor firkant i midten som tellerom 1. Blodcelletelletavle; 2. Dekkglass; Ved telling i tellerommet beregnes vanligvis det totale bakterietallet for fem ruter, deretter oppnås gjennomsnittsverdien av hver rute, multiplisert med 25 eller 16 for å få det totale bakterietallet i en stor rute, som deretter konverteres til totalt antall bakterier i lml-bakterieoppløsningen. Forutsatt at det totale bakterietallet i fem kvadratiske rutenett er A og fortynningsfaktoren til bakterieløsningen er B. Hvis det er 25 telleplater i rutenettet, er det totale bakterietallet i 1mL bakterieoppløsning A/5 × 25 × 104 × B=50000A · B. På samme måte, hvis det er 16 telleplater i det kvadratiske rutenettet, er det totale bakterietallet i 1mL bakterieoppløsning A/5 × 16 × 104 × B=32000A · B
