PH meter - Bestemmelse og justering av medium pH
Alle mikroorganismer påvirkes av pH i miljøet de lever i. Ofte begrenser tilstedeværelsen av selektive arter pH-området der de vokser. Noen ganger kan surheten eller alkaliniteten til mediet også fungere som en vekstseleksjonsfaktor. For biokjemiske testmedier er imidlertid pH-området der mikroorganismer viser tk-aktivitet i substratet smalere enn pH-området som kreves for vekst: derfor er det viktig å justere pH til mediet til det forventede området. Når laboratoriet tilbereder mediet i henhold til mediesammensetningen, må pH kontrolleres og justeres. Det må påpekes at selv for det ferdiglagde syntetiske, dehydrerte mediet levert av produsenten (spesielt for noe dehydrert lagermedium), må den endelige pH-verdien måles etter å ha laget forsøksmediet.
Den mest nøyaktige måten å måle pH i et medium på er med en pH-meter. Før bruk må den kalibreres med en standard bufferløsning med kjent pH (vanligvis er pH 4 til 7). Skyll elektroden på pH-måleren med destillert vann og dypp den ned i dyrkningsmediet i begerglasset, og les deretter pH på dyrkingsmediet fra skalaen til pH-måleren. Hver produsent gir detaljerte bruksanvisninger for hver type pH-måler.
Ved tilberedning av kulturmediet kan PH enkelt justeres ved å bruke et pH-meter med mekanisk omrøring. Kulturmediet bør tilberedes i en beholder (som et stort begerglass) som kan røres kontinuerlig. eller Teflon-innpakket magneter. pH-verdien til det agarholdige mediet må justeres etter tining, noe som enkelt gjøres med en oppvarmbar magnetrører. Når du justerer pH, bruk en standard bufferløsning med kjent pH for å kalibrere pH-måleren først. Sett deretter komposittelektroden og motstandstermometeret (hvis noen) i mediet, tilsett sakte passende mengde saltsyre og natriumhydroksid fra enden av begerglasset vekk fra elektroden, slik at mediet kan nå og opprettholde den nødvendige pH.
Temperaturkompensasjonen til pH-måleren bør ta hensyn til effekten av temperaturen på elektrodesystemet: I noen fortynninger og medier endrer pH seg betraktelig med temperaturen. For flytende medier og fortynninger kan pH vanligvis justeres og måles enten ved 25 grader eller ved den temperaturen de brukes ved.
pH til agarmediet må justeres etter oppløsning, og oppløsningstemperaturen er over 45 grader: derfor bør pH til det faste mediet bestemmes ved brukstemperaturen. På dette tidspunktet bør en flathodet komposittelektrode brukes, og temperaturkompensasjonen til pH-måleren skal kalibreres manuelt. Ved tilberedning av kulturmediet, hvis det fastslås at pH i dyrkingsmediet er forskjellig mellom smeltetilstand og størkningstilstand, betyr det at det er en feil ved justering av pH.
På samme måte, når det tilberedte mediet varmesteriliseres (f.eks. autoklaveres), kan det også gjennomgå pH-endringer. For det dehydrerte mediet har produsenten tatt dette i betraktning, og vanligvis er det ikke nødvendig å justere pH, men pH til mediet som skal brukes bør kontrolleres nøye. Hvis pH i det dehydrerte agarmediet må justeres under gjenoppløsning eller klargjøring, er det best å justere den med filtersterilisert saltsyre og natriumhydroksidløsning etter steriliseringstrinnet for å unngå dannelse av overoppheting av mediet. Ved tilberedning av medier med forskjellige råvarer eller legemidler, må pH-verdien til mediet kontrolleres etter autoklavering. I tillegg, hvis pH i mediet viser seg å endre seg etter hver autoklav, kan pH justeres på passende måte når mediet tilberedes. Det er imidlertid fortsatt nødvendig å bestemme den endelige pH-verdien til mediet etter sterilisering.
