Grunnleggende og strukturelle elementer i et fluorescensmikroskop
Fluorescensmikroskopi bruker et punkt med høy lyseffektivitet for å sende ut lys med en viss bølgelengde (som ultrafiolett lys 3650 tommer eller lilla blått lys 4200 tommer) gjennom filtersystemet som eksitasjonslyset for å eksitere de fluorescerende stoffene i prøven for å avgi fluorescens av forskjellige farger Etter det, observer gjennom forstørrelsen av objektivlinsen og okularet. På denne måten, under en sterk kontrastbakgrunn, selv om fluorescensen er veldig svak, er den lett å identifisere og har høy følsomhet. Den brukes hovedsakelig til forskning på cellestruktur og funksjon og kjemisk sammensetning. Den grunnleggende strukturen til et fluorescensmikroskop er sammensatt av et vanlig optisk mikroskop pluss noe tilbehør (som en fluorescerende lyskilde, et eksitasjonsfilter, en tofarget stråledeler og et blokkeringsfilter, etc.). Fluorescerende lyskilde – bruk vanligvis ultrahøytrykks kvikksølvlampe (50-200W), som kan sende ut lys med forskjellige bølgelengder, men hvert fluorescerende stoff har en eksitasjonsbølgelengde som produserer den sterkeste fluorescensen, så et eksitasjonsfilter ( Generelt, det er ultrafiolette, lilla, blå og grønne eksitasjonsfiltre), som bare lar eksitasjonslys med en viss bølgelengde passere gjennom og bestråle prøven, mens de absorberer annet lys. Etter at hvert stoff er bestrålet med eksitasjonslys, avgir det synlig fluorescens med lengre bølgelengde enn bestrålingsbølgelengden på svært kort tid. Fluorescens er spesifikk og generelt svakere enn eksitasjonslys. For å observere spesifikk fluorescens, må blokkering (eller undertrykkelse) legges til bak objektivlinsen og brukes sammen med den.
Forskjellen mellom fluorescensmikroskop og vanlig mikroskop
1. Belysningsmetoden er vanligvis episkopisk, det vil si at lyskilden projiseres på prøven gjennom objektivlinsen;
2. Lyskilden er ultrafiolett lys, bølgelengden er kortere, og oppløsningen er høyere enn for vanlige mikroskoper;
3. Det er to spesielle filtre, det ene foran lyskilden brukes til å filtrere bort synlig lys, og det mellom okularet og objektivlinsen brukes til å filtrere ut ultrafiolette stråler for å beskytte det menneskelige øyet.
Fluorescensmikroskop er også et slags optisk mikroskop, hovedforskjellen er at eksitasjonsbølgelengden til de to er forskjellig. Dette bestemmer forskjellen mellom fluorescensmikroskopet og det vanlige optiske mikroskopet når det gjelder struktur og bruk.
Fluorescensmikroskopi er et viktig verktøy i immunfluorescerende cytokjemi. Den er sammensatt av hovedkomponenter som lyskilde, filterplatesystem og optisk system. Det er å bruke en viss bølgelengde av lys for å eksitere prøven for å avgi fluorescens, og å observere fluorescensbildet til prøven ved å forsterke objektivlinsen og okularsystemet.
