Prinsippet, egenskapene og anvendelsen av fluorescensmikroskop
Prinsippet og de strukturelle egenskapene til fluorescensmikroskopet: fluorescensmikroskopet bruker en punktlyskilde med høy lyseffektivitet for å sende ut en viss bølgelengde av lys (som ultrafiolett lys 3650 tommer eller lilla blått lys 4200 tommer) gjennom filtersystemet som eksitasjon lys for å stimulere fluorescensen i prøven. Etter at stoffet avgir fluorescens av forskjellige farger, observeres det gjennom forstørrelsen av objektivlinsen og okularet. På denne måten, under en sterk kontrastbakgrunn, selv om fluorescensen er veldig svak, er den lett å identifisere og har høy følsomhet. Den brukes hovedsakelig til forskning på cellestruktur og funksjon og kjemisk sammensetning. Den grunnleggende strukturen til et fluorescensmikroskop er sammensatt av et vanlig optisk mikroskop pluss noe tilbehør (som en fluorescerende lyskilde, et eksitasjonsfilter, en tofarget stråledeler og et blokkeringsfilter, etc.). Fluorescerende lyskilde – bruk vanligvis ultrahøytrykks kvikksølvlampe (50-200W), som kan sende ut lys med forskjellige bølgelengder, men hvert fluorescerende stoff har en eksitasjonsbølgelengde som produserer den sterkeste fluorescensen, så et eksitasjonsfilter ( Generelt, det er ultrafiolette, lilla, blå og grønne eksitasjonsfiltre), som bare lar eksitasjonslys med en viss bølgelengde passere gjennom og bestråle prøven, mens de absorberer annet lys. Etter at hvert stoff er bestrålet med eksitasjonslys, avgir det synlig fluorescens med lengre bølgelengde enn bestrålingsbølgelengden på svært kort tid. Fluorescens er spesifikk og generelt svakere enn eksitasjonslys. For å observere spesifikk fluorescens, kreves det et blokkerende (eller undertrykkende) filter bak objektivlinsen.
Den har to funksjoner: den ene er å absorbere og blokkere eksitasjonslyset fra å komme inn i okularet, for ikke å forstyrre fluorescensen og skade øynene; den andre er å velge og la den spesifikke fluorescensen passere gjennom, og vise en spesifikk fluorescerende farge. De to filtrene må brukes sammen.
Det er to typer fluorescensmikroskoper når det gjelder deres optiske veier:
1. Transmisjonsfluorescensmikroskop: Eksitasjonslyskilden føres gjennom prøvematerialet gjennom en kondensatorlinse for å eksitere fluorescens. En mørk feltsamler er ofte brukt, og en vanlig solfanger kan også brukes til å justere speilet slik at eksitasjonslyset omdirigeres og omgås til prøven. Dette er et eldre fluorescerende mikroskop. Fordelen er at fluorescensen er sterk ved lav forstørrelse, men ulempen er at fluorescensen avtar med økningen av forstørrelsen. Derfor er det bedre å observere større prøvematerialer.
2. Epi-fluorescensmikroskop er en ny type fluorescensmikroskop utviklet i moderne tid. Forskjellen er at eksitasjonslyset faller fra objektivlinsen ned til overflaten av prøven, det vil si at den samme objektivlinsen brukes som belysningskondensatoren og objektivlinsen for å samle fluorescens. En dikroisk stråledeler må legges til i lysbanen, som er 45 grader unna det lette uranet. Eksitasjonslyset reflekteres inn i objektivlinsen og samles på prøven. Fluorescensen generert av prøven og eksitasjonslyset som reflekteres av linseoverflaten til objektivlinsen og dekkglassoverflaten går inn i objektivlinsen samtidig, og går tilbake til tofargestråledeleren for å gjøre eksitasjonslyset atskilt fra fluorescens , gjenværende eksitasjonslys absorberes av blokkerende filtre. For eksempel å bytte til en kombinasjon av forskjellige eksitasjonsfilter/tofarget stråledeler/blokkeringsfilter, kan det møte behovene til forskjellige fluorescerende reaksjonsprodukter. Fordelen med denne typen fluorescensmikroskop er at belysningen av synsfeltet er jevn, avbildningen er klar, og jo større forstørrelsen er, desto sterkere er fluorescensen.
Hvordan bruke et fluorescensmikroskop
1. Slå på lyskilden, og kvikksølvlampen med ultrahøytrykk må varmes opp i noen minutter for å nå det lyseste punktet.
2. Transmisjonsfluorescensmikroskopet må installere det nødvendige eksitasjonsfilteret mellom lyskilden og kondensatoren, og installere det tilsvarende blokkeringsfilteret bak objektivlinsen. Epi-fluorescensmikroskoper må sette inn det nødvendige eksitasjonsfilteret/dobbeltfarget stråledeler/blokkeringsfilterinnsats i sporene i den optiske banen.
3. Observer med en linse med lav forstørrelse, og juster midten av lyskilden slik at den er plassert i midten av hele belysningspunktet i henhold til justeringsenheten til forskjellige modeller av fluorescensmikroskoper.
4. Plasser prøvestykket og observer etter fokusering. Vær oppmerksom under bruk: ikke observer direkte med endefilteret, for ikke å forårsake øyeskade; når du observerer prøver med en oljelinse, må du bruke en spesiell oljelinse uten fluorescens; etter at høytrykkskvikksølvlampen er slått av, kan den ikke slås på igjen umiddelbart, og den må testes. Den kan startes på nytt etter 5 minutter, ellers vil den være ustabil og påvirke levetiden til kvikksølvlampen.
