Hva er fordelene med konfokal lasermikroskopi
Sammenlignet med tradisjonelle bredfeltsmikroskoper, har laserskannende konfokalmikroskopi egenskapene til høy oppløsning, høy oppløsning og høy følsomhet. Det er mye brukt innen biomedisin og har blitt et viktig bildeverktøy på dette feltet. Hvorfor kan confocal få så mye kjærlighet, og hvilke fordeler har det? Denne artikkelen lister opp tre aspekter for å diskutere fordelene med konfokal.
Saml kun signalet på fokalplanet, slik at bildet blir klart fra uskarphet
Så hvordan oppnår konfokalmikroskopi denne fordelen? Dette skyldes den konfokale nøkkelmaskinvaren – nålehullet, som vist i figur 2. Det er et lite hull foran detektoren og plassert på det optiske plankonjugatet til prøvens brennplan. Når eksitasjonslyset bestråler prøven, vil både fokalplanet og ikke-fokalplanet i prøveområdet bli begeistret for å generere fluorescenssignaler, juster passende pinhole-størrelse (vanligvis 1 Au), slik at fluorescenssignalet på fokalplanet (grønn stiplet linje) kan være fluorescerende signaler (røde og blå stiplede linjer) som passerer gjennom nålehullet for å nå detektoren ut av fokalplanet, kan ikke nå detektoren gjennom nålehullet. Ved å legge til hardware pinholes kan konfokalen få klare bilder av høy kvalitet uten å endre metoden for å lage vanlige fluorescensmikroskoper.
På grunn av eksistensen av nålehullet kan vi bare hente signalet på fokalplanet og få et todimensjonalt bilde med høy oppløsning. Ved kontinuerlig justering av Z-akseposisjonen kan todimensjonale bilder ved forskjellige Z-akseposisjoner oppnås, og en serie kontinuerlige "optiske skiver"-bilder kan oppnås. Etter å ha oppnådd disse optiske skivene, kan 3D-modulen utstyrt med instrumentprogramvaren brukes til å rekonstruere 3D-bildet for å konstruere et klart 3D-bilde. Denne ikke-destruktive, kontinuerlige samlingen av optiske skivebilder realiserer funksjonen til "celle-CT".
Nøyaktigheten av kolokaliseringsresultater er nært knyttet til oppløsningen til bildet, så vi må velge en bildebehandlingsmetode med høyere oppløsning når vi utfører kolokaliseringseksperimenter. Sammenlignet med tradisjonelle mikroskoper har konfokalmikroskopi blitt et kraftig verktøy for kolokaliseringsforskning på grunn av dens høyoppløselige fordeler.
På grunn av eksistensen av diffraksjonsgrensen er den konvensjonelle konfokale optiske oppløsningen rundt 200nm. Når vi trenger å observere strukturer større enn 200nm, kan konfokal nøyaktig bestemme graden av kolokalisering. Hvis kolokaliseringsanalyse er nødvendig, kan kolokaliseringsanalysemodulen som er utstyrt i konfokalprogramvaren velges.
