Hvilke prøvespesifikasjoner trengs for lysmikroskopi?
I prøveforberedelsesprosessen til det optiske mikroskopet er skivetykkelsen på prøven mellom 2-25um; skivetykkelsen til elektronmikroskopet er innenfor 50-100nm (bortsett fra høyspenningselektronmikroskopet, hvis prøvetykkelse kan nå 1um), så skivemetoden som brukes er ikke den samme.
Når det gjelder bærer, er bæreren for optisk mikroskopseksjon glassglass, mens bæreren for elektronmikroskopseksjonen er rutenett.
Når det gjelder fiksering, fikseres skivene av det optiske mikroskopet med et sammensatt fiksativ, mens skivene av elektronmikroskopet fikseres gjentatte ganger med et enkelt fiksativ.
Når det gjelder farging, er fargingen av optiske prøver relativt enkel. I henhold til ulike observasjonsprøver og typer optiske mikroskop er det vanligvis nok å farge med noen faste fargemidler. Det er mange og kompliserte metoder for re-farging av elektronmikroskopprøver, som negativ farging, sølvfarging og så videre.
Når det gjelder innstøping, brukes parafin, kollodium, gelatin osv. som innstøpningsmidler for optiske mikroskopseksjoner; epoksyharpiks, polystyrenharpiks, isobutylenharpiks og vannløselig harpiks brukes som innstøpningsmidler for elektronmikroskopseksjoner.
For å sikre at synsfeltet til mikroskopet kan være jevnt og fullt opplyst, må det optiske belysningssystemet justeres når mikroskopet først installeres og feilsøkes. Dette er et viktig middel og den mest grunnleggende måten å bruke mikroskopet på riktig og oppnå korrekte og pålitelige resultater. krav. I tillegg er riktig mestring av justeringen av det optiske banesystemet for belysning et nødvendig trinn etter å ha byttet lyskildepæren under bruk av mikroskopet, og det er også et nødvendig middel for å kontrollere ytelsen til mikroskopet fra tid til annen i løpet av daglig bruk. Justeringen av det optiske banesystemet for mikroskopbelysning inkluderer hovedsakelig følgende fire elementer: 1. Foreløpig justering av lyskildelampekammeret utenfor mikroskopet ① Åpne skallet til lampekammeret først, trykk på fjærklemmen for å sette halogenpæren inn i sokkel, og unngå direkte kontakt med pæren med fingrene under montering (kan skilles med myk klut eller papir) for å unngå Det er fingeravtrykk og annet smuss på pæren, som vil påvirke levetiden til pæren. ②Plasser lampehuset på bordet, etter å ha slått på strømmen, bruk en spesiell skrutrekker for å justere fokusknapphullet på lampen (merket med "←→"), slik at glødetråden projiseres på veggen 1-2 m unna, og filamentbildet justeres. Juster deretter høyden på lampen og juster gjengehullet (merket med "──") for å gjøre posisjonen til glødetråden passende; Juster deretter venstre og høyre posisjon til lampen for å justere skruehullet (merket med "──") for å gjøre venstre og høyre posisjon av glødetråden passende .
2. Hensikten med å kontrollere og korrigere posisjonen til lyskildebelysningsmidlet (glødetråden) i mikroskopet er å justere bildeenden av lyskilden rett inn i synsfeltet til objektivlinsen, og å sikre at synsfeltet på mikroskopet er fullstendig og jevnt opplyst fra lyskildens perspektiv. Belysning, som er en forutsetning for justering av Kuhler lysanlegg. Grunnleggende verktøy som trengs: Sentreringsteleskopet er utstyrt når mikroskopet kjøpes. ① Koble fra den frostede glasshylsen i lampehuset, og sett lampehuset tilbake på mikroskopet. ② Velg en 10× objektivlinse, slå på lyskildeprogrammet for å finne prøven og fokuser den tydelig, og bruk deretter en 40× objektivlinse for å fokusere prøven tydelig (40× objektivlinse Du kan se hele bildet av filamentet ); ③ Åpne blenderåpningen og feltmembranen til kondensatoren maksimalt; ④ Koble fra et av okularene, erstatt med et sentreringsteleskop, ta tak i den hvite delen, strekk det svarte okularet med den andre hånden. Du kan se filamentbildet i synsfeltet; ⑤ Hvis posisjonen til filamentet ikke er egnet, juster "──"-hullet for å justere filamentbildet i horisontal retning, og juster "──"-hullet for å justere filamentbildet i vertikal retning til Juster filamentbildet til det lyse sirkulære bildet som akkurat fyller blenderåpningen til objektivlinsen; ⑥ Etter justeringen, sett inn den frostede glasshylsen tilbake til den opprinnelige posisjonen, koble fra sentreringsteleskopet og sett på okularet for neste justering. Den ovennevnte justeringen av belysningslyskildens lampekammer utenfor mikroskopet og verifiseringen av posisjonen til lyskildens lyslegeme inne i mikroskopet trenger bare å utføres når mikroskopet først installeres og feilsøkes og når pæren skiftes ut. , og mikroskopet kan ikke justeres tilfeldig ved bruk av mikroskopet. I tilfelle forvirring kan den justeres tilbake til den opprinnelige tilstanden i henhold til trinnene ovenfor.
3. Riktig justering av Kohler-belysningssystemet En av hovedoppgavene for riktig justering av mikroskopet er justeringen av det optiske belysningsbanesystemet, og nøkkelen er justeringen av Kohler-belysningssystemet. For hver person som bruker et mikroskop, spesielt de som tar mikrofotografier, bør de ha en viss forståelse og mestring av prinsippet for Kuhler-belysningssystemet og dets justeringstrinn for å gi fullt spill til funksjonene til mikroskopet og ta bilder. Bildene som kommer ut kan være mer konsistente og perfekte i effekt. Prinsippet til Kohler-belysningssystemet er ganske enkelt: lyset som sendes ut av et hvilket som helst punkt på lyskildebelysningen kan lyse opp synsfeltet til mikroskopet, og lyset som sendes ut av hvert punkt på lyskildebelysningen samles, og i feltet av mikroskopet En meget full og jevn belysning oppnås. Hensikten med å justere Kuhler-lyssystemet er å oppnå jevn og tilstrekkelig belysning for det observerte synsfeltet, og å forhindre at strølys påvirker eller forstyrrer bildesystemet, for å unngå dugg på filmen under fotografering. Nødvendige komponenter for et høyjustert Kohler-belysningssystem: feltmembran, kondensatorlinsesystem som kan justeres på aksen. ① Velg 10× objektivlinse og 10× okular ② Sett frontlinsen på kondensatoren inn i den optiske banen, juster blenderåpningen til en moderat posisjon (ikke for stor eller liten), og hev deretter kondensatoren til øverste posisjon, og juster kondensatorens dreieskive til lysfelt "J" posisjon ③ Juster feltmembranen til minimum (0,1)
④ Sett den forseglede biologiske prøven på scenen, slå på lyskilden og fokuser tydelig
⑤ Det vil være et delvis opplyst område eller lyspunkt i synsfeltet, som er det uskarpe bildet av feltmembranen, der detaljene til prøven kan sees tydelig; utenfor er det et mørkere synsfelt, som kanskje ikke nødvendigvis ser detaljene i prøven tydelig
⑥Juster kondensatoren litt nedover, slik at det lyse punktet i synsfeltet gradvis krymper, og gradvis blir et klart polygonalt bilde, som er det klare bildet av feltmembranen;
⑦ Generelt er det polygonale bildet ikke i sentrum av synsfeltet, og det er nødvendig å justere et par sentreringsskruer til kondensatoren for å justere det polygonale bildet av feltmembranen til den sentrale posisjonen;
⑧Åpne gradvis diafragmaen til synsfeltet for å gjøre polygonbildet til en innskrevet polygon i synsfeltet, og kontroller justeringsstatusen videre. Hvis justeringen ikke er ideell, fortsett å finjustere justeringsskruen;
⑨Åpne membranen til synsfeltet litt, slik at det polygonale bildet bare forsvinner på kanten av synsfeltet. Så langt er justeringen av Kohler-belysningssystemet fullført. Etter at Kohler-lyssystemet er justert, er hele synsfeltet jevnt opplyst, og mikrofotografiene som er tatt er lyse og klare med normal kontrast.
