Biomikroskopi angående volumet av vevsblokker
Biologisk mikroskopi Så langt er kaldfiksering, frosset ultratynt snitt og frysetørking rutinemetoder for vevs- og cellerøntgenmikrosnitt. Detaljene i denne metoden er forklart som følger:
For biologiske mikroskoper med kondensator kan kondensatoren flyttes opp og ned for å gjøre lysstyrken moderat, og blenderåpningen til det variable lyset kan også endres for å oppnå en moderat 9b lysstyrke. Hvis lyset er solrikt, kan kondensatoren heves passende opp, og blenderåpningen til den variable lyskilden kan forstørres passende. Hvis lyset er for sterkt, kan kondensatorlinsen senkes passende, og blenderåpningen til det kryssende lyset kan reduseres passende. Hvis du fortsatt føler deg blendende i dette tilfellet, kan du velge et passende filter og plassere det på braketten under kondensatoren. Denne eiken vil kunne oppnå lysstyrken som tilfredsstiller deg. Å justere øvre og nedre posisjoner til kondensatoren, justere blenderstørrelsen på den variable optiske avlesningen og velge et passende filter krever selvfølgelig en viss periode med øvelse for å få erfaring.
En svært viktig sak innen biologisk mikroskopi er at i prosessen med prøvetaking og separering av celler, etter frysetørking og harpiksinnstøping (FD), etter frysing av ultratynne aggregater, og etter frysetørking, innholdet av 65 elementer i hver del må håndteres forsiktig. Cellene som skal analyseres kan ikke skades. Fordi røntgenmikroanalyse ikke bare involverer mange trinn, men også koster mye. Hvis de analyserte cellene er skadede celler eller døde celler etter lang tids og flertrinns prosessering, er det svært beklagelig å trekke feil konklusjoner. For eksempel har kardiomyocytter separert ved kollagenasebehandling to former, den ene er lang stang
Biomikroskopi Mengden og fordelingen av elektrolytter i disse to celletypene er ganske forskjellige. Na er svært høyt og K er svært lavt i sirkulære kardiomyocytter, og konsentrasjonen av ca i nematoder er svært høy. Etter å ha sjekket med andre analysemetoder, er det bevist at den høye Na og den lave K av runde celler og den høye Ca i mitokondrier skyldes skaden på cellemembranen under celleseparasjonsprosessen. Den iskalde fikseringsmetoden til celler og vev er vanligvis å ta i bruk quenching og fiksering først, og deretter lagre dem i flytende nitrogen. Slokkefiksering er svært viktig for effekten av konservering. Levende celler eller friskt vev er rike på vann. Ved bråkjøling blir de delene av cellene eller vevet som er i direkte kontakt med det knuste kjølemediet (spesielt ved bråkjøling med flytende nitrogen) ofte frosset og fiksert først, og danner dermed et "skall", som hindrer de sentrale delene av cellene ble knust og kaldfiksert. Derfor, når man gjør X-line mikroområdeanalyse, finner man ofte at det er iskrystaller i sentrum av større celler. For å forhindre at dette skjer, brukes et stoff med et smeltepunkt som er høyere enn flytende nitrogen, men lavere enn 806c, som et ødelagt kjølemiddel. Det finnes mange slike stoffer, men det enkleste å få tak i, det billigste er konsentrert propan (kokepunkt - 42.120c, smeltepunkt - 187.10c, molekylvekt 44.1), og kjølehastigheten er den raskeste . Men ulempen er at den er brannfarlig.
Biologisk mikroskop kan sette muskelfiberen på et spesielt stativ, slik at når muskelfibersammentrekningen når en viss fase og må fikses, start umiddelbart dysen for å spraye flytende propan til muskelfiberen for å slukke og fikse den. Deretter ble muskelfibrene sammen med rammen tatt ut og lagt i flytende nitrogen. Ved fiksering av blodceller eller isolerte celler, konsentrer først cellene ved sentrifugering ved lav hastighet, overfør cellene til et sølvglass med god varmeledningsevne, plasser hetteglasset i flytende propan og frys for fiksering. Ved fiksering av rottebukspyttkjertelen i Hall-laboratoriet ble de to stålblokkene forhåndskjølt med flytende helium (eller flytende nitrogen), og de to kobberblokkene ble klemt fast med tang og plassert på forsiden og baksiden av bukspyttkjertelen for å slukke og fikse bukspyttkjertelen. Vev eller celler kan lagres i flytende nitrogen for langtidslagring etter bråkjøling og fiksering.
Biologisk mikroskopi I tillegg til den for tiden mest respekterte frosne ultratynne snittmetoden, er her en annen deponeringsteknikk brukt av forskere. Et stoff tilsettes for å danne et sediment med komponenten som skal analyseres for å immobilisere den før analyse, og sedimentet blir deretter analysert. For eksempel bruker folk ofte oksalat og pyroantimonat for å deponere ca i muskelceller. Førstnevnte er ikke følsom nok for den lave konsentrasjonen av Ca i cytoplasmaet; pyroantimonat er mer følsomt og kan danne elektrontette avleiringer med fritt Ca i hjernen, men pyroantimonat er ikke forenlig med natrium, mangan, barium, jern Det dannes også avleiringer og er mindre spesifikke. Prøveforberedelsesprosessen ligner tilberedningen av vanlige transmisjonselektronmikroskopprøver med ultratynne seksjoner, forskjellen er at 3 prosent kaliumpyroantimonat (fosfatbuffer saltvann, pH 7,6) ble fiksert i 6 timer før fiksering, og på de fargede muskel ultratynne snittene, Svarte avleiringer ble sett i midtlinjen til bånd A og 2 av hver sarkomer, og ufargede seksjoner ble brukt til røntgenmikroanalyse. Diaminobenzidintetrahydroklorid (DAB) ble brukt til å utfelle hemholdige stoffer og så videre. Kombinasjonen av histokjemisk utfellingsreaksjon og røntgenmikrodifferensieringsbro kan vurderes i laboratorier som ikke har frosne ultratynne snittforhold. Semikvantitativ kan gjøres i henhold til topphøyden til elementene som skal analyseres
