Beskriv i detalj seleksjonstrinnene og metodene for fluorescerende prober for konfokalmikroskopi
I eksperimenter med konfokale mikroskoper kan noen eksperimentelle indikatorer påvises ved hjelp av autofluorescensen til selve prøven eller eksogene stoffer, men de fleste stoffene som skal testes har ikke målbar fluorescens og må merkes med fluorescerende prober. Den har et målbart fluorescerende signal. Så, hvordan velge fluorescerende prober for konfokal mikroskopi?
1. Bestem indikatorene som skal testes i henhold til formålet med eksperimentet
Når deteksjonsindeksen er bestemt, bestemmes også utvalgsområdet for fluorescerende prober. Det kan ses at valget av hvilken fluorescerende sonde som skal brukes i forsøket bestemmes av formålet med forsøket. For eksempel, hvis formålet med eksperimentet er å studere endringene av kalsiumioner i kardiomyocytter når atrieflimmer oppstår, kan det fastslås at stoffet som skal testes er kalsiumioner i kardiomyocytter, og utvalget av fluorescerende prober er begrenset til kalsiumioneprober som kan merke levende celler. Nål.
2. Bestem rekkevidden av tilgjengelige fluorescerende prober
For nye eksperimentelle stoffer eller indikatorer, hvis formålet med eksperimentet ikke er å utforske nye fluorescerende prober, kan du velge å bruke modne prober og merkingsmetoder. Typen eller utvalget av fluorescerende prober som kan merke stoffet som skal testes, kan bestemmes ved å søke i autoritativ litteratur eller produktkataloger fra kjente reagensfirmaer i inn- og utland.
3. Undersøk om egenskapene til den fluorescerende sonden oppfyller kravene til klargjøring av fluorescerende prøver
Egenskapene til fluorescerende prober påvirker direkte merkingen av prøver og de eksperimentelle resultatene. Derfor, før du velger fluorescerende prober og merker prøver i eksperimentet, er det nødvendig å fullt ut forstå deres fluorescensegenskaper. Egenskapene til fluorescerende prober som skal undersøkes inkluderer:
1. Reaksjonskarakteristikker til lysprober og prøver
2. Sensitivitet og fluorescensintensitet for fluorescerende prober
3. Spektralegenskaper til prøver merket med fluorescerende prober
4. Stabilitet av fluorescens
5. Interaksjon mellom multippel fluorescens i prøven
