Fluorescensmikroskopi deteksjonsmetode
fluorescensmikroskop
Fluorescensmikroskopi er et grunnleggende verktøy for immunfluorescenscytokjemi. Den er sammensatt av hovedkomponenter som lyskilde, filterplatesystem og optisk system. Den bruker en viss bølgelengde av lys for å eksitere prøven og avgi fluorescens, som forstørres gjennom et objektiv og okularsystem for å observere fluorescensbildet til prøven (Figur 1).
(1) Lyskilde
I dag er en 200W kvikksølvlampe med ultrahøyt trykk ofte brukt som lyskilde. Den er laget av kvartsglass, med en sfærisk form i midten og en viss mengde kvikksølv fylt inni. Under drift fører utladningen mellom de to elektrodene til at kvikksølvet fordamper, og trykket inne i kulen øker raskt. Når kvikksølvet fordamper fullstendig, kan det nå 50-70 standard atmosfærisk trykk, som vanligvis tar omtrent 5-15 minutter. Luminescensen til kvikksølvlamper med ultrahøyt trykk er resultatet av utladningen mellom elektrodene, som kontinuerlig dissosierer og reduserer kvikksølvmolekyler og sender ut fotoner. Det avgir sterkt ultrafiolett og blåfiolett lys, som er tilstrekkelig til å eksitere forskjellige fluorescerende stoffer, derfor er det mye brukt i fluorescensmikroskoper.
Forholdsregler for bruk av et fluorescensmikroskop
(1) Følg nøye instruksjonene fra fluorescensmikroskopfabrikken og ikke endre programmet vilkårlig.
(2) Inspeksjon bør utføres i et mørkt rom. Etter å ha kommet inn i mørkerommet, koble til strømmen og tenn kvikksølvlampen med ultrahøyt trykk i 5-15 minutter. Etter at lyskilden avgir sterkt lys og stabiliserer seg, bør øynene fullt ut tilpasse seg mørkerommet før man begynner å observere prøven.
(3) For å forhindre UV-skade på øynene, bør vernebriller brukes når lyskilden justeres.
(4) Inspeksjonstiden bør være 1-2 timer hver gang. Hvis den overstiger 90 minutter, reduseres lysstyrken til ultrahøytrykkskvikksølvlampen gradvis og fluorescensen svekkes; Prøver eksponert for ultrafiolett stråling i 3-5 dager
Etter min ble fluorescensen også betydelig redusert; Så den maksimale varigheten bør ikke overstige 2-3 timer.
(5) Levetiden til lyskilden i fluorescerende mikroskop er begrenset, og prøven bør undersøkes sentralt for å spare tid
Spar tid og beskytt lyskilden. Når været er varmt, bør en elektrisk vifte legges til for å spre varmen og kjøle ned. Ved bytte av ny lyspære bør brukstiden registreres fra begynnelsen. Når lyset er slått av og du vil bruke det igjen, må du vente til lyspæren er tilstrekkelig avkjølt før du tenner den. Unngå å tenne lyskilden flere ganger om dagen.
(6) Observer prøven umiddelbart etter farging, siden fluorescensen gradvis vil svekkes over tid. Hvis prøven oppbevares i en polyetylenplastpose ved 4 grader, kan det forsinke fluorescensdempningstiden og forhindre fordampning av monteringsmidlet.
(7) Vurderingskriteriene for fluorescenslysstyrke er generelt delt inn i fire nivåer, nemlig "ett" - ingen eller synlig svak fluorescens. "+" - Bare synlig fluorescens er synlig. ++- Synlig med lys fluorescens. "+++" – Synlig og blendende fluorescens.
