Hvordan blir morfologien til mikrobielle celler observert under et mikroskop?
Mikroskoper ble oppfunnet for å se smilende gjenstander som ikke kan sees med det blotte øye. Mikroorganismer er veldig små, så de må forstørres og observeres ved hjelp av et mikroskop. I tillegg finnes det mange typer mikroorganismer, så i utgangspunktet kan de fleste optiske mikroskoper observere mikroorganismer. Det neste spørsmålet er hvilken type mikroskop som skal brukes til observasjon og analyse av hva slags mikroorganismer. Vanlige mikroskoper som kan brukes til å observere mikrobiell morfologi inkluderer biologiske mikroskoper, fasekontrastmikroskoper, inverterte mikroskoper, fluorescensmikroskoper, konfokale mikroskoper, etc.
Følgende beskriver de ulike mikroskopene som brukes til å observere mikroorganismer:
1. Vanlig optisk mikroskop bruker naturlig lys eller lys som lyskilde, og bølgelengden er omtrent 0,4 μm. Oppløsningen til mikroskopet er halvparten av bølgelengden, det vil si 0,2 μm, og det minste bildet som er synlig for det blotte øye er 0,2 mm. Derfor kan bruk av et oljespeil (nedsenkningsspeil) for å forstørre 1000 ganger forstørre 0,2 μm partiklene til 0,2 mm synlige for det blotte øye. Vanlige optiske mikroskoper kan brukes til observasjon av bakterier, aktinomyceter og sopp.
2. Mørkfeltmikroskopi brukes ofte til å observere ufarget mikrobiell morfologi og bevegelse. Etter at mørkefeltskondensatoren er installert i det vanlige mikroskopet, kan ikke lyset trenge direkte inn fra midten, og synsfeltet er mørkt. Når prøven mottar skrått lys fra kanten av kondensatoren, kan den spres, slik at lyse mikroorganismer som bakterier eller spiroketter kan observeres i den mørke feltbakgrunnen.
3. Fasekontrastmikroskop Fasekontrastmikroskop bruker lyseffekten til faseforskjellsplaten til å endre lysfasen og amplituden til direkte lys, og konvertere forskjellen i lysfase til lysintensitetsforskjell. Under et fasekontrastmikroskop, når lys passerer gjennom en ufarget prøve, er forskjellen i lysfase forårsaket av inkonsistensen av tettheten til forskjellige deler av prøven, og morfologien, indre strukturen og bevegelsesmåten til mikroorganismer kan observeres.
4. Fluorescensmikroskop Fluorescensmikroskop er i utgangspunktet det samme som vanlig optisk mikroskop, hovedforskjellen er lyskilden, filteret og kondensatoren. For tiden bruker de fleste av dem epi-lysenheter, og høytrykks kvikksølvlamper brukes ofte som lyskilder, som kan avgi ultrafiolett eller blåfiolett lys. Det finnes to typer filtre: eksitasjonsfilter og absorpsjonsfilter. I tillegg til generelle lysfeltskondensatorer, kan mørkefeltskondensatorer også brukes i fluorescensmikroskoper som bruker blått lys for å forbedre kontrasten mellom fluorescens og bakgrunn. Denne metoden er anvendelig for påvisning eller identifikasjon av bakterier farget med fluorescerende pigmenter eller kombinert med fluorescerende antistoffer.
5. Elektronmikroskoper bruker elektronstrøm som lyskilde, og bølgelengden er titusenvis av ganger forskjellig fra synlig lys, noe som forbedrer oppløsningen betraktelig. Den bruker også en magnetisk spole som et optisk forsterkningssystem, og forstørrelsen kan nå titusenvis eller hundretusenvis av ganger. Det brukes ofte til observasjon av viruspartikler og bakteriell ultrastruktur.
Observasjon av ufargede mikrobielle prøver:
Ufargede prøver kan generelt brukes til å observere bakteriell morfologi, kraft og bevegelse. Bakterier er fargeløse og gjennomsiktige når de ikke er farget, og observeres under et mikroskop hovedsakelig av forskjellen mellom brytningsindeksen til bakteriene og det omgivende miljøet. Bakterier med flageller beveger seg kraftig, mens bakterier uten flageller viser uregelmessig brownsk bevegelse. Levedyktige bakterier som Treponema pallidum, Leptospira og Campylobacter har særegne former og bevegelsesmønstre, som er av diagnostisk betydning. Vanlig brukte metoder er trykkfallmetode, hengende fallmetode og kapillærmetode.
1. Påfør vaselin rundt det konkave hullet på det rene konkave glasset ved å henge dråpemetoden, bruk en inokulasjonsløkke til å ta en ring av bakteriesuspensjon og plasser den i midten av dekkglasset, og juster deretter det konkave hullet i det konkave glasset med dråpen i midten av dekkglasset og dekk det, snu det så raskt, trykk lett på dekkglasset slik at det fester seg tett til vaselinen på kanten av det konkave hullet, og observer under et mikroskop med høy forstørrelse (eller mørkt felt).
2. Ta en ring av bakteriesuspensjon med en inokulasjonsløkke og plasser den i midten av et rent glassglass ved trykkfallsmetode, og dekk forsiktig til bakteriesuspensjonen med et dekkglass, pass på å unngå bobler og overløp av bakteriesuspensjonen . Etter å ha stått stille i noen sekunder, observer under et høyeffektmikroskop i lyst felt (eller mørkt felt).
3. Kapillærmetoden brukes hovedsakelig for undersøkelse av kinetikken til anaerobe bakterier. Velg vanligvis 60~70mm lang. Etter å ha suget den anaerobe bakteriesuspensjonen gjennom en kapillær med en åpning på 0,5-1,0 mm, forsegle de to endene av kapillæren med en flamme. Kapillæren ble festet på glassplaten med plastpapir, og observert under en høyeffektlinse i mørkt felt.
Observasjon av fargede mikrobielle prøver med et mikroskop:
Etter at bakterieprøven er farget, på grunn av den skarpe fargekontrasten mellom bakteriene og det omkringliggende miljøet, de morfologiske egenskapene til bakteriene (som størrelse, form, arrangement osv.) til bakteriene og noen spesielle strukturer (som f.eks. som kapsler, flageller, sporer osv.) kan tydelig observeres under et vanlig optisk mikroskop, og bakteriene kan klassifiseres og identifiseres i henhold til fargingsreaktiviteten.
(1) Generell prosedyre for bakteriell farging Den generelle prosedyren for bakteriell farging er: smøre (tørking) – fiksering – farging.
1. Utstryk Preparering av blod, sekreter, ekskresjoner, punkteringsvæske og flytende kultur, og direkte tynnfilmutstryk på glassglass; obduksjon eller infisert dyrevev, smør lesjonen med en bomullspinne for prøvetaking. For klargjøring av bakteriekolonier eller plener på fast medium, bruk først en inokulasjonsløkke for å ta en ring med vanlig saltvann og legg den i midten av glassplaten, bruk deretter en steril inokuleringsløkke for å ta en liten mengde kultur og male den jevnt i vanlig saltvann, fordel den på en 1 cm2 belagt overflate, og la den tørke naturlig ved romtemperatur eller tørke sakte på avstand.
2. Hensikten med fiksering er å drepe bakterier, koagulere bakteriell protein og struktur, og lette farging; fremme bakterier til å feste seg til objektglasset for å unngå å bli vasket bort av vann under vask; endre permeabiliteten til bakterier til fargestoffer, noe som er gunstig for farging av bakterielle intracellulære strukturer. Det fikses vanligvis ved oppvarming med en flamme, og det tørkede smøret føres raskt gjennom flammen i 3 ganger. Det er bedre å ikke brenne huden på baksiden av hånden når den berører lysbildet.
3. Farging I henhold til forskjellige inspeksjonsformål, velg forskjellige fargingsmetoder for farging. Når du farger, tilsett fargeløsningen dråpevis for å øke dekningen.
4. Beisemiddel Ethvert stoff som kan forsterke affiniteten mellom fargestoffet og den fargede gjenstanden, feste fargestoffet på den fargede gjenstanden og forårsake en endring i permeabiliteten til cellemembranen kalles et beisemiddel. Vanligvis brukt er alun, garvesyre, metallsalter og jod, etc., og oppvarming brukes også for å fremme farging. Beisemidler kan brukes mellom primærfarging og motfarging, og kan også brukes etter fiksering eller inneholdt i fikseringsmiddel og farging.
5. Avfarging Ethvert kjemisk middel som kan fjerne fargen på den fargede gjenstanden kalles en avfarging. Etanol, aceton, etc. brukes ofte som avfargingsmidler. Avfargingsmidlet kan påvise graden av stabilitet av kombinasjonen av bakterier og fargestoffer, som kan brukes til differensiell farging.
6. Motfarging Bakterier eller deres strukturer som har blitt avfarget er ofte motfarget med en motfargeløsning for enkel observasjon. Fargen på motfargeløsningen er forskjellig fra den på den primære fargeløsningen for å danne en skarp kontrast. Motfargingen bør ikke være for sterk, for ikke å dekke over fargen på den første fargingen.
