Prinsipper, egenskaper og bruk av fluorescensmikroskopi
Prinsippet og de strukturelle egenskapene til et fluorescensmikroskop: Et fluorescensmikroskop bruker en punktlyskilde med høy lyseffektivitet, som sender ut en viss bølgelengde av lys (som ultrafiolett lys 3650 tommer eller ultrafiolett blått lys 4200 tommer) gjennom et fargefiltreringssystem som en eksitasjonslys. Fluorescenssubstansen i prøven begeistres til å avgi forskjellige farger av fluorescens, og observeres deretter gjennom forstørrelse av objektivet og okularet. På denne måten, selv med svak fluorescens, er den lett gjenkjennelig og svært følsom under sterk kontrasterende bakgrunn, hovedsakelig brukt til å studere cellestruktur og funksjon, samt kjemisk sammensetning. Den grunnleggende strukturen til et fluorescensmikroskop er sammensatt av et vanlig optisk mikroskop og noe tilbehør (som en fluorescerende lyskilde, eksitasjonsfilter, bikromatisk stråleseparator og blokkeringsfilter, etc.). Fluorescerende lyskilder – bruker vanligvis ultrahøytrykks kvikksølvlamper (50-200W), som kan sende ut lys med ulike bølgelengder. Hvert fluorescerende stoff har imidlertid en eksitasjonslysbølgelengde som produserer den sterkeste fluorescensen, så eksitasjonsfiltre (vanligvis ultrafiolette, lilla, blå og grønne eksitasjonsfiltre) må legges til for å la bare en viss bølgelengde av eksitasjonslys passere gjennom og lyse opp prøven, mens den absorberer alt annet lys. Etter å ha blitt bestrålt av eksitert lys, avgir hvert stoff synlig fluorescens med lengre bølgelengde enn bestrålingen i løpet av svært kort tid. Fluorescens har spesifisitet og er generelt svakere enn eksitasjonslys. For å observere spesifikk fluorescens, må et blokkerende (eller undertrykkende) filter legges bak objektivlinsen.
Den har to funksjoner: For det første absorberer og blokkerer den eksitasjonslys fra å komme inn i okularet for å unngå forstyrrende fluorescens og skade øynene; for det andre velger den og lar spesifikk fluorescens passere, og viser en spesifikk fluorescensfarge. Begge typer filtre må velges for bruk sammen.
