Hvorfor er forstørrelsen av oljelinsen større enn for den vanlige objektivlinsen?
Grunner til at bakterier må fikses før farging i mikrobiologiske eksperimenter:
1: Dreper celler, er lett å farge med fargestoff.
2: Få bakteriene til å feste seg til glassplaten, og det er ikke lett å bli vasket bort med vann.
Ved fiksering bør den tørkes sakte. Hvis du virkelig vil øke hastigheten, kan du tørke den noen ganger i avstanden over flammen til alkohollampen. Ikke la glasset gli varme opp, ellers kan det ødelegge livsformen til bakterier.
Gramfarging og mikroskopisk observasjon av bakterier
1. Eksperimentelt prinsipp
Gramfargingsprinsipp: Bakterier reagerer forskjellig på Gramfarging på grunn av sammensetningen og strukturen til celleveggene deres. Celleveggen til Gram-positive bakterier er hovedsakelig en nettverksknute dannet av peptidoglykan. Ved behandling med etanol blir porestørrelsen til nettverksstrukturen mindre på grunn av dehydrering, og permeabiliteten avtar, slik at komplekset av krystallfiolett-jod Stoffet er ikke lett å elueres og beholdes i cellen, og blå- lilla fargen på det primære fargestoffet er fortsatt beholdt etter avfarging og motfarging. Peptidoglykanlaget i celleveggen til Gram-negative bakterier er tynt og lipidinnholdet er høyt, så når avfargingsbehandlingen utføres, løses lipidet opp av etanol (eller aceton), og permeabiliteten til celleveggen øker, så at komplekset av krystallfiolett-jod Det er lettere å bli eluert, og etter motfarging med en motfarging farges cellene med den røde fargen på motflekken. Mikroskopavbildningsprinsipp: Moderne vanlige optiske mikroskoper bruker to linsesystemer med okular og objektivlinse for å forstørre bildet, så de kalles ofte sammensatte mikroskoper. I det optiske systemet til mikroskopet er ytelsen til objektivlinsen den mest kritiske, og forstørrelsen av oljelinsen er den største, som er den viktigste for mikrobiologisk forskning. Hovedformålet med å tilsette nedsenkingsolje mellom glassplaten og linsen er å øke lysstyrken på belysningen og øke oppløsningen til mikroskopet. Olje brukes i stedet for luft som lystransmisjonsmedium for å redusere lysbrytningen eller totalrefleksjonen av lys og gjøre det observerte bildet klarere.
2. Eksperimentelt utstyr
1. Kolonier:
Escherichia coli 24-timers næringsagar skråkultur,
Staphylococcus aureus om 24 timers skråkultur av næringsagar, Bacillus subtilis 12-18h skråkultur av næringsagar.
2. Løsninger eller reagenser:
Destillert vann, jodløsning, krystallfiolett fargeløsning, 95 prosent alkohol, safranin-fargeløsning, sedertreolje. 3. Instrument:
Mikroskop, glassglass, inokulasjonsløkke, spritlampe, pinsett, linsevev.
3. Eksperimentelle trinn
a:
1. Smøre
Ta ut objektglasset, tenn objektglasset, brenn ut alkoholen på objektglasset og steriliser det, legg en liten dråpe destillert vann i midten, bruk inokulasjonssløyfen til å plukke forsiktig en liten mengde bakterier på det skrå mediet til testen rør, Under hele prosessen bør reagensrørets munn være over alkohollampen, og hastigheten bør være høy for å forhindre kontaminering av kulturmediet. Smør deretter de små vanndråpene på glassplaten i en sirkulær bevegelse, stopp når vanndråpene er uklare, og vent til de tørker og fikserer seg.
2. Primærfarging
Dropp krystallfiolett (det er hensiktsmessig å bare dekke bakteriefilmen) på kolonien, flekker i 1-2 minutter, hell av fargeløsningen og skyll med fint vann fra toppen av objektglasset til eluatet er fargeløst, og plasser flekken på lysbildet. Rist av vannet på skivene.
3. Mordant
Tilsett jodløsning dråpevis for å vaske bort gjenværende vann, dekk til i ca. 1 min og vask med vann.
4. Avfarging
Rist av vannet på glassplaten, vipp glassplaten og tilsett 95 prosent alkohol for å avfarge den under den hvite bakgrunnen, til den utstrømmende alkoholen ikke ser blå ut, skyll straks alkoholen med vann og plasser glassplaten Shake av vannet på skivene.
5. Motfarging
Motbein med safraninløsning i ca. 1-2 minutter, vask med vann og tørk deretter med absorberende papir
6. Mikroskopisk undersøkelse:
Se etter bakteriekolonien som skal observeres under linsen med lav forstørrelse (fortsett å flytte lysbildet, hvis du kjenner en rød skygge, stopp umiddelbart, juster forstørrelsen, hvis det ikke er en koloni, fortsett å finne), løft linsehylsen, og bytt deretter til oljespeilet. Tilsett en dråpe sedertreolje til prøveområdet, og senk forsiktig linsehylsen med grovjusteringen slik at oljelinsen er nedsenket i oljen og nesten berører prøven. Hev kondensatoren til høyeste posisjon og åpne blenderåpningen helt, bruk grovjusteringen til å heve linserøret sakte til objektbildet vises i synsfeltet og bruk finjusteringen for å gjøre det klart og i fokus.
