Fordeler med forbedringer i laserskannende multifotonmikroskoper
Laserskannende multifotonmikroskop er en betydelig forbedring av optisk mikroskopi, hovedsakelig manifestert i evnen til å observere dype strukturer av levende celler, faste celler og vev, og oppnå klare og skarpe fler-lags Z-planstrukturer, nemlig optiske skiver, som kan brukes til å konstruere tre-dimensjonale faste strukturer. Konfokalmikroskop bruker en laserlyskilde, som utvides til å fylle hele fokalplanet til objektivlinsen, og deretter konvergeres til svært små punkter på brennplanet til prøven gjennom objektivsystemet til objektivlinsen. I henhold til den numeriske blenderåpningen til objektivlinsen er diameteren til det skarpe belysningspunktet omtrent 0,25-0,8 μm, og dybden er omtrent 0,5-1,5 μm. Størrelsen på konfokalpunktet bestemmes av mikroskopets design, laserbølgelengde, objektive egenskaper, innstillinger for skanningsenhetstilstand og prøveegenskaper. Belysningsområdet og dybden til et feltmikroskop er stort, mens belysningen av et konfokalt mikroskop er fokusert på et brennpunkt på brennplanet. Den grunnleggende fordelen med konfokalmikroskopi er at den kan utføre fin optisk seksjonering på tykke fluorescerende prøver (opptil 50 μm eller mer), med en tykkelse på omtrent 0,5 til 1,5 μm. Serien med optiske skivebilder kan oppnås ved å flytte prøven opp og ned ved hjelp av Z--aksens trinnmotor på mikroskopet. Innsamlingen av bildeinformasjon kontrolleres innenfor * *-planet, uten forstyrrelser fra signaler som sendes ut fra andre posisjoner på prøven. Etter å ha fjernet påvirkningen fra bakgrunnsfluorescens og økt signal-til-støy-forholdet, er kontrasten og oppløsningen til konfokale bilder betydelig forbedret sammenlignet med tradisjonelle feltbelysningsfluorescensbilder. I mange prøver veves intrikate strukturelle komponenter sammen for å danne komplekse systemer, men når nok optiske seksjoner kan samles inn, kan vi bruke programvare til å rekonstruere dem i tre dimensjoner. Denne eksperimentelle metoden har blitt mye brukt i biologisk forskning for å belyse de komplekse strukturelle og funksjonelle relasjonene mellom celler eller vev.
