Grunnleggende struktur for konfokal fluorescensmikroskopi
(1) Skannemodul
Skannemodulen består hovedsakelig av en pinhole-lysstang (kontrollerer tykkelsen på optiske skiver), et spektroskop (endrer retningen for lysutbredelse i henhold til bølgelengde), et emisjonsfluorescenskolorimeter (velger lys innenfor et visst bølgelengdeområde for deteksjon), og en detektor (fotomultiplikatorrør). Den blandede fluorescensen i den fluorescerende prøven kommer inn i skanneren, og etter å ha blitt valgt av deteksjonspinhole-lysstangen, spektrometeret og kolorimeteret, deles den inn i forskjellige monokromatiske fluorescenser, som detekteres i forskjellige fluorescenskanaler og danner tilsvarende konfokale bilder. Samtidig kan flere parallelle monokromatiske fluorescensbilder og deres sammensatte bilder vises på dataskjermen.
(2) Fluorescensmikroskopisystem
Mikroskop er hovedkomponenten i LSCM, som er relatert til bildekvaliteten til systemet. Mikroskopets optiske bane kan enkelt settes inn i et uendelig fjernt optisk system med optiske alternativer uten å påvirke bildekvaliteten og målenøyaktigheten. Målet bør være et apokromatisk objektiv med stor numerisk blenderåpning, flatt felt, som er gunstig for fluorescenserverv og klar avbildning. Konverteringen av objektivlinsegruppen, valg av fargefiltergruppen, bevegelsesjustering av scenen og minnelåsing av fokalplanet bør alle styres automatisk av datamaskinen.
Fluorescensmikroskopet som brukes i laserskanningskonfokalmikroskopi er generelt det samme som et konvensjonelt fluorescensmikroskop, men det har sine egne egenskaper: det må kobles til en skanner, slik at laseren kan gå inn i mikroskopobjektivet for å bestråle prøven og lage fluorescensen som sendes ut av prøven, når detektoren; En lysbanekonverteringsenhet er nødvendig, som konverterer kvikksølvlamper til lasere, og lysintensiteten til kvikksølvlampen kan justeres.
(3) Vanlige lasere
Laserkildene som brukes i laserskanningskonfokalmikroskopi inkluderer enkeltlaser- og multilasersystemer, og de ofte brukte laserne inkluderer følgende tre typer:
Halvlederlaser: 405nm (nær ultrafiolett spektrallinje)
Argonionlaser: 457nm, 477nm, 488nm, 514nm (blått grønt lys)
He-Ne laser: 543nm (grønt lys He-Ne grønn laser) 633nm (rødt lys He-Ne rød laser)
UV-laser (UV-laser): 351 nm, 364 nm (UV-lys)
(4) Hjelpeutstyr
Luftkjølte, vannkjølte kjølesystemer og regulerte strømforsyninger.
Det grunnleggende arbeidsprinsippet for et laserskannende konfokalmikroskop er først å sende ut en viss bølgelengde av eksitasjonslys fra laseren. Etter forsterkning passerer lyset gjennom den opplyste pinhole-lysstangen i skanneren for å danne en punktlyskilde. Objektivlinsen fokuserer på brennplanet til prøven, og de tilsvarende opplyste punktene på prøven eksiteres og avgir fluorescens. Etter å ha passert gjennom lysstangen for deteksjonshullet, når den detektoren og avbildes på datamaskinens overvåkingsskjerm. På denne måten dannes et fullstendig konfokalt bilde av fluorescensbildene av hvert punkt av prøven på fokalplanet, som kalles en lys skive.
