Forskjeller mellom fluorescensmikroskopi og konfokal mikroskopi
Fluorescensmikroskop
1. Fluorescensmikroskop bruker ultrafiolett lys som en lyskilde for å bestrige objektet som blir inspisert, noe som får det til å avgi fluorescens, og deretter observere formens form og plassering under mikroskopet. Fluorescensmikroskopi brukes til å studere absorpsjon, transport, distribusjon og lokalisering av stoffer i celler. Noen stoffer i celler, for eksempel klorofyll, kan fluoresce når de blir utsatt for ultrafiolett stråling; Det er også noen stoffer som ikke kan avgi fluorescens i seg selv, men som også kan avgi fluorescens hvis de er farget med fluorescerende fargestoffer eller fluorescerende antistoffer og bestrålet med ultrafiolett lys. Fluorescensmikroskopi er et av verktøyene for kvalitativ og kvantitativ forskning på slike stoffer.
2. Prinsipp for fluorescensmikroskop:
(A) Lyskilde: Lyskilden avgir lys av forskjellige bølgelengder (fra ultrafiolett til infrarød).
(B) Eksitasjonsfilter Lyskilde: Overføring av lys av en spesifikk bølgelengde som kan forårsake fluorescens i prøven, mens du blokkerer lys som er ubrukelig for spennende fluorescens.
(C) Fluorescerende prøver: vanligvis farget med lysstoffrør.
(D) Blokkering av filter: Det overfører selektivt fluorescens ved å blokkere eksitasjonslys som ikke blir absorbert av prøven, og noen bølgelengder i fluorescensen blir også selektivt overført. Et mikroskop som bruker ultrafiolett lys som en lyskilde for å få det opplyste objektet til å avgi fluorescens. Elektronmikroskopet ble først samlet av Knorr og Haruska i Berlin, Tyskland i 1931. Dette mikroskopet bruker høyhastighets elektronstråler i stedet for lysstråler. På grunn av den mye kortere bølgelengden til elektronstrømmen sammenlignet med lysbølger, kan forstørrelsen av et elektronmikroskop nå 8 0 0000 ganger, med en minimumsoppløsningsgrense på 0,2 nanometer. Skanningselektronmikroskopet, som først ble brukt i 1963, lar folk se de bittesmå strukturer på overflaten av gjenstander.
3. Søknadsomfang: Brukes til å forstørre bilder av små objekter. Generelt brukt til observasjoner av biologi, medisin, mikroskopiske partikler, etc.
Konfokalt mikroskop
1. Konfokalt mikroskop tilfører en halvreflekterende halvlinser til den reflekterte lysbanen, som avlytter det reflekterte lyset som har gått gjennom linsen i andre retninger. På fokuspunktet er det en baffel med et pinhole som ligger ved fokuspunktet, og bak baffelen er et fotomultiplikatorrør. Det kan tenkes at det reflekterte lyset før og etter deteksjonslysfokuset ikke kan fokuseres på det lille hullet gjennom dette konfokale systemet og vil bli blokkert av baffelen. Så fotometeret måler den reflekterte lysintensiteten ved fokuspunktet.
2. Prinsipp: Tradisjonelle optiske mikroskop bruker feltlyskilder, og bildet av hvert punkt på prøven påvirkes av diffraksjon eller spredt lys fra nabopunktene; Laserskanningskonfokalt mikroskop bruker en laserstråle for å belyse et pinhole og danne en punktlyskilde for å skanne hvert punkt på brennplanet til prøven. Det opplyste punktet på prøven blir avbildet ved deteksjons -pinhole, og mottas punkt for punkt eller linje med et fotomultiplikatorrør (PMT) eller en kald koblingsanordning (CCCD) etter å ha oppdaget pinhole, og danner raskt et fluorescensbilde på datamaskinens skjermbilde. Belysnings -pinhole og deteksjons -pinhole er konjugert i forhold til fokalplanet til objektivlinsen. Punktene på fokalplanet er samtidig fokusert på belysningen pinhole og emisjons pinhole, og peker utenfor fokalplanet vil ikke bli avbildet ved deteksjons -pinhole. Det resulterende konfokale bildet er det optiske tverrsnittet av prøven, og overvinner ulempen med uskarpe bilder i generelle mikroskop.
