Hvordan fluorescensmikroskopi skiller seg fra konfokal lasermikroskopi
Fluorescensmikroskop
1. Et fluorescensmikroskop bruker ultrafiolett lys som lyskilde for å belyse objektet som inspiseres for å få det til å avgi fluorescens, og deretter observere formen og plasseringen av objektet under mikroskopet. Fluorescensmikroskopi brukes til å studere absorpsjon og transport av stoffer i celler, samt distribusjon og posisjonering av kjemiske stoffer. Noen stoffer i celler, som klorofyll, kan fluorescere etter å ha blitt bestrålt av ultrafiolette stråler; enkelte stoffer kan ikke selv fluorescere, men hvis de er farget med fluorescerende fargestoffer eller fluorescerende antistoffer, kan de fluorescere etter bestråling med ultrafiolette stråler. Fluorescensmikroskopi er et av verktøyene for kvalitativ og kvantitativ forskning på slike stoffer.
2. Prinsippet for fluorescensmikroskop:
(A) Lyskilde: Lyskilden utstråler lys med forskjellige bølgelengder (fra ultrafiolett til infrarødt).
(B) Lyskilde for eksitasjonsfilter: sender lys med en spesifikk bølgelengde som kan få prøven til å fluorescere, mens den blokkerer lys som er ubrukelig for å stimulere fluorescens.
(C) Fluorescerende prøver: Generelt farget med fluorescerende pigmenter.
(D) Blokkerende filter: Blokkerer eksitasjonslyset som ikke absorberes av prøven og overfører selektivt fluorescens. Noen bølgelengder i fluorescensen overføres også selektivt. Et mikroskop som bruker ultrafiolett lys som lyskilde for å få den opplyste gjenstanden til å fluorescere. Elektronmikroskopet ble først satt sammen i 1931 i Berlin, Tyskland av Knorr og Hallowska. Dette mikroskopet bruker en høyhastighets elektronstråle i stedet for en lysstråle. Siden bølgelengden til elektronstrømmen er mye kortere enn lysets, kan forstørrelsen til elektronmikroskopet nå 800,000 ganger, og minimumsoppløsningsgrensen er 0,2 nanometer. Skanningselektronmikroskopet, som begynte å bli brukt i 1963, lar folk se de små strukturene på overflaten av objekter.
3. Bruksområde: Brukes til å forstørre bilder av små objekter. Vanligvis brukt i observasjon av biologi, medisin, mikroskopiske partikler, etc.
konfokalt mikroskop
1. Det konfokale mikroskopet legger til en semi-reflekterende semi-linse til den optiske banen til det reflekterte lyset, som bryter det reflekterte lyset som har passert gjennom linsen til andre retninger. Det er en ledeplate med et nålhull i fokuset, og nålehullet er plassert Ved brennpunktet, bak ledeplaten, er et fotomultiplikatorrør. Det kan tenkes at det reflekterte lyset før og etter deteksjonslysfokuset passerer gjennom dette konfokale systemet og ikke kan fokuseres på det lille hullet, og vil bli blokkert av ledeplaten. Så det fotometeret måler er intensiteten av reflektert lys i fokuset.
2. Prinsipp: Tradisjonelle optiske mikroskoper bruker feltlyskilder, og bildet av hvert punkt på prøven vil bli forstyrret av diffraksjon eller spredt lys fra tilstøtende punkter; laserskannende konfokale mikroskoper bruker laserstråler for å danne punktlyskilder gjennom opplysende nålehull for å belyse det indre av prøven. Hvert punkt i fokalplanet skannes, og det opplyste punktet på prøven avbildes ved deteksjonsnålhullet, som mottas punkt for punkt eller linje for linje av fotomultiplikatorrøret (PMT) eller kaldkoblingsanordningen (cCCD) bak deteksjonen pinhole, og er raskt Et fluorescerende bilde dannes på dataskjermen. Belysningsnålhullet og deteksjonsnålhullet er konjugert i forhold til objektivlinsens fokalplan. Punkter på fokalplanet er fokusert på belysningsnålhullet og emisjonsnålhullet samtidig. Punkter utenfor fokalplanet vil ikke bli avbildet ved deteksjonsnålhullet. Dette oppnås Konfokale bilder er optiske tverrsnitt av prøver, som overvinner manglene ved uskarpe bilder i vanlige mikroskoper.
3. Bruksområder: Involverer medisin, dyre- og plantevitenskapelig forskning, biokjemi, bakteriologi, cellebiologi, vevembryologi, matvitenskap, genetikk, farmakologi, fysiologi, optikk, patologi, botanikk, nevrovitenskap, marinbiologi og materialvitenskap , elektronisk vitenskap , mekanikk, petroleumsgeologi, mineralogi.
