Hvordan velge riktig fluorescensmikroskop
Fluorescensmikroskop er et standard mikroskopisk bildebehandlingsutstyr for laboratorier og patologiavdelinger. Den bruker fluorescensegenskaper for observasjon og avbildning. Det er mye brukt innen cellebiologi, nevrobiologi, botanikk, mikrobiologi, patologi, genetikk og andre felt. Fluorescensavbildning har fordelene med høy sensitivitet og høy spesifisitet, og er svært egnet for observasjon av fordelingen av spesifikke proteiner og organeller i vev og celler, studiet av kolokalisering og interaksjon, sporing av livsdynamiske prosesser som ionekonsentrasjonsendringer , etc.
Valg av mikroskop
Fluorescensmikroskoper er hovedsakelig delt inn i tre kategorier: stående fluorescensmikroskop (egnet for seksjonering), inverterte fluorescensmikroskoper (egnet for levende celler, tatt i betraktning seksjonering), stereoskopiske fluorescensmikroskoper (egnet for større prøver, som planter, sebrafisk (voksen/ embryo), medaka, mus/rotteorganer, etc.).
Utvalg av fluorescensfilterkuber
I tillegg til å vurdere eksitasjons- og emisjonsbølgelengdene til fluorescerende prober, må valget av filterblokker også vurdere om det er ikke-spesifikk eksitasjon og kryssfarge for flerfargemerkede prøver. I forsøket vil vi prøve å velge bølgelengden nærmest eksitasjonstoppen for eksitasjon, og mottaksområdet må inkludere emisjonstoppen. For eksempel er eksitasjonstoppen til Alexa Fluor 488 500nm, og et 480/40 eksitasjonsfilter kan velges i et fluorescensmikroskop. Fluorescensfilterterninger som vanligvis brukes i fluorescensmikroskoper kan deles inn i to typer: langpass (LP for kort) og båndpass (BP for kort), som også må velges etter behov.
Valg av fluorescerende lyskilde
For tiden ofte brukte fluorescerende lyskilder inkluderer kvikksølvlamper, metallhalogenlamper og LED-lyskilder som har utviklet seg raskt de siste årene. Spekteret til den fluorescerende lyskilden er kontinuerlig og diskontinuerlig, og energien vil være forskjellig i forskjellige bånd. På grunn av det relativt smale spektralbåndet, mer stabil energiutgang, lang levetid, sikkerhet og miljøvern og mange andre fordeler, blir LED-lyskilden gradvis den viktigste lyskilden til fluorescensmikroskop.
konfokalt mikroskop
I tradisjonell fluorescensmikroskopobservasjon, på grunn av overlapping av fluorescerende markørstoffer og autofluorescensstrukturer, er de tett kombinert, mens den tradisjonelle epifluorescensmikroskopobjektivlinsen ikke bare samler lys fra fokalplanet, men samler også spredt lys over og under brennplan , noe som resulterer i sterkt redusert bildeoppløsning og kontrast.
Konfokal avbildning løser dette problemet ved kun å oppdage den delen av lyset som reflekteres fra fokalplanet. Lyskilden går gjennom et nålehull for å danne en liten og fin lysflekk på brennplanet. Lyset som sendes ut fra fokalplanet samles opp av objektivlinsen. Det meste av fluorescensen som sendes ut fra punktet over eller under fokalplanet til objektivlinsen kan ikke konvergere til det lille hullet. Bare fluorescensen som ligger i fokalplanet og en liten del av off-fokus fluorescensen kan passere gjennom pinhole, mens lysstrålene utenfor fokalplanet konvergerer foran eller bak på pinhole plate og blokkeres fra å komme inn i detektoren gjennom nålehullet. Det oppdagede bildet er bildet fra fokalplanet, så den endelige bildekvaliteten er kraftig forbedret.
På grunn av fordelene og gjennomførbarheten til funksjonene til det laserskannende konfokalmikroskopet, er det konfokale mikroskopet en uunnværlig eksperimentell assistent innen cellebiologi, botanikk og celleforskning med høy presisjon. Samtidig, i det fremtidige vitenskapelige forskningssenteret, vil det være det mest grunnleggende og sentrale vitenskapelige forskningsverktøyet.
