Mikroskopisk direkte tellemetode for mikroorganismer
Direkte telling ved hjelp av et hemocytometer under et mikroskop er en vanlig metode for å telle opp mikroorganismer. Denne metoden har fordelene ved å være intuitiv og rask. En riktig fortynnet bakteriesuspensjon (eller sporesuspensjon) lastes inn i tellekammeret mellom hemocytometerglasset og dekkglasset for mikroskopisk telling. Siden volumet til tellekammeret er fast (0,1 mm³), kan det totale antallet mikroorganismer per volumenhet beregnes basert på antall mikroorganismer observert under mikroskopet. Siden denne metoden teller både levende og døde mikrobielle celler, er den også kjent som totaltellingsmetoden.
Et hemocytometer er et spesielt glassglass som består av tre plattformer dannet av fire spor. Midtplattformen er videre delt i to halvdeler av et tverrgående spor. Et rutenett er etset på hver halvdel av plattformen. Hvert rutenett er delt inn i ni store firkanter, og den sentrale store firkanten fungerer som tellekammer, hvor mikrobiell telling utføres. Strukturen til hemocytometeret er vist i figur Ⅷ‑1.
Det er to vanlige typer graderingsspesifikasjoner for tellekamre. En type har en stor firkant delt inn i 16 mellomstore firkanter, og hver mellomstore firkant er videre delt inn i 25 små firkanter (Figur Ⅷ‑2). Den andre typen har en stor firkant delt inn i 25 mellomstore firkanter, og hver mellomstore firkant er delt inn i 16 små firkanter (Figur Ⅷ‑1C). Uavhengig av spesifikasjonen til tellekammeret, forblir det totale antallet små firkanter innenfor hver store firkant det samme: 16 × 25=400 små firkanter, som vist i figur Ⅷ‑2.
Hvert store kvadrat har en sidelengde på 1 mm, noe som gir et areal på 1 mm². Etter å ha plassert dekkglasset er høyden mellom objektglasset og dekkglasset 0,1
mm; derfor er volumet til tellekammeret 0,1 mm³.
For telling telles vanligvis det totale antallet mikroorganismer i fem mellomstore firkanter. Gjennomsnittsverdien for hvert middels kvadrat beregnes deretter og multipliseres med 16 eller 25 for å få det totale antallet innenfor en stor kvadrat. Til slutt konverteres denne verdien til det totale antallet mikroorganismer i 1 ml av bakteriesuspensjonen.
