Klargjøring og observasjon av biologiske prøver for elektronmikroskopi
Oppløsningen til et mikroskop avhenger av bølgelengden til lyset som brukes. Elektronmikroskopet, som begynte å dukke opp i 1933, bruker en elektronstråle med mye kortere bølgelengde enn synlig lys som lyskilde, slik at oppløsningen det kan oppnå er sterkt forbedret sammenlignet med et optisk mikroskop. Forskjellen i lyskilder bestemmer også en rekke forskjeller mellom elektronmikroskoper og optiske mikroskoper.
I henhold til forskjellene i prinsippene for elektronstråleavbildning og de forskjellige måtene å virke på prøver på, har moderne elektronmikroskop utviklet seg til mange typer. For tiden er de mest brukte transmisjonselektronmikroskoper og skanningselektronmikroskoper. Den totale forstørrelsen av førstnevnte kan være mellom 1000-1000000. Den totale forstørrelsen av sistnevnte kan variere mellom 20 og 300,000 ganger. Dette eksperimentet introduserer hovedsakelig fremstilling av to typer mikroskopprøver, transmisjonselektronmikroskop og skanningselektronmikroskop.
2. Utstyr
1. Bakterier Escherichia coli (Escherichia coli) skråstilt.
2. Løsning eller reagens amylacetat, konsentrert svovelsyre, absolutt etanol, sterilt vann, 2 % natriumfosfowolframat (pH 6.5-8.0) vandig løsning, 0,3 % polyetylen formaldehyd (løselig i kloroform) løsning, celler Pigment c, ammoniumacetat, plasmid pBR322.
3. Instrumenter eller andre redskaper: vanlig optisk mikroskop, kobbernetting, porselenstrakt, begerglass, fat, steril dropper, steril pinsett, pinser, lysbilder, tellebrett, vakuumbeleggmaskin, tørketrommel med kritiske punkter, etc.
3. Driftstrinn
(1) Prøveforberedelse og observasjon for transmisjonselektronmikroskopi
1. Behandling av metallnett
Prøven for optisk mikroskopi plasseres på et objektglass for observasjon. Men i transmisjonselektronmikroskopi, siden elektroner ikke kan trenge gjennom glassplaten, kan nettingmaterialer bare brukes som bærere, vanligvis kalt bærenett. Bærenettet kan deles inn i mange forskjellige spesifikasjoner på grunn av forskjellige materialer og former, blant dem er det mest brukte 200-400-nettet (antall hull) kobbernett. Kobbernettet må behandles før bruk for å fjerne smuss og holde det rent, ellers vil det påvirke kvaliteten på støttefilmen og klarheten til prøvebildene. Dette eksperimentet bruker et 400-nett av kobber, som kan behandles som følger: først bløtlegg og blek det med amylacetat i flere timer, skyll det deretter med destillert vann flere ganger, og bløt det deretter i absolutt etanol i dehydrering. Hvis kobbernettet fortsatt ikke er rent etter metodene ovenfor, kan du bløtlegge det i fortynnet konsentrert svovelsyre (1:1) i 1 til 2 minutter, eller koke det i 1 % NaOH-løsning i noen minutter, skylle det med destillert vann flere ganger, og legg den deretter i vannfri Dehydrer i etanol og sett til side.
2. Klargjøring av støttemembran
Ved observasjon av prøver bør bærenettet også dekkes med et lag ustrukturert, jevn film, ellers vil små prøver lekke ut fra hullene i bærenettet. Denne filmen kalles vanligvis en støttefilm eller bærefilm. Støttefilmen bør være elektrongjennomsiktig, og dens tykkelse bør generelt være mindre enn 20 nm; under påvirkning av elektronstrålen bør filmen også ha en viss mekanisk styrke for å opprettholde strukturell stabilitet og ha god varmeledningsevne; i tillegg bør støttenettverket brukes i elektronmikroskopi. Det skal ikke være noen synlig struktur under, ingen kjemisk reaksjon med prøven som bæres, og ingen forstyrrelse av observasjonen av prøven. Tykkelsen er vanligvis omtrent 15 nm. Bærefilmen kan være plastfilm (som kollosjonsfilm, polyetylenformaldehydfilm, etc.), karbonfilm eller metallfilm (som berylliumfilm, etc.). Under normale arbeidsforhold kan plastfilm oppfylle kravene. Blant plastfilmer er kollosjonsfilm relativt lett å tilberede, men styrken er ikke like god som polyetylenformaldehydfilm.
