Klargjøring og observasjon av biologiske prøver for elektronmikroskopi
Oppløsningen til mikroskopet avhenger av bølgelengden til lyset som ble brukt, elektronmikroskopet begynte å dukke opp i 1933 skyldes bruken av en mye kortere bølgelengde enn det synlige lyset til elektronstrålen som lyskilde, slik at oppløsningen den kan oppnå enn det optiske mikroskopet sterkt forbedret. Den forskjellige lyskilden bestemmer også en rekke forskjeller mellom elektronmikroskopet og det optiske mikroskopet.
I henhold til forskjellene i avbildningsprinsippet til elektronstrålen og prøvens rolle på de forskjellige måtene, har det moderne elektronmikroskopet blitt utviklet for å danne en rekke typer, for tiden * vanlig brukt er transmisjonselektronmikroskopet og skanningselektronet mikroskop, førstnevnte kan være i området 1,000-1,000,000 ganger den totale forstørrelsen av endringsområdet, sistnevnte kan være i den totale forstørrelsen av { {4}},000 ganger den totale forstørrelsen av endringene mellom. Dette eksperimentet fokuserer på forberedelse av prøver for de to typene mikroskoper, transmisjonselektronmikroskop og skanningselektronmikroskop.
Materialer
1. Stamme Escherichia coli (Escherichia coli, Escherichia coli) skråstilt.
2. Løsninger eller reagenser Amylacetat, konsentrert svovelsyre, vannfri etanol, sterilt vann, 2 % natriumfosfowolframsyre (pH 6.5-8.0) vandig løsning, 0,3 % polyvinylformaldehyd (oppløst i triklormetan) løsning, cytokrom c, ammoniumacetat, plasmid pBR322.
3. Instrumenter eller annet utstyr Vanlig optisk mikroskop, kobbernett, porselenstrakt, begerglass, flat fat, steril byrett, steril pinsett, lansett, objektglass, ** telleplate, vakuumbelegger, tørketrommel med kritiske punkter og så videre.
Driftstrinn
(I) Prøveforberedelse og observasjon av transmisjonselektronmikroskopi
1. Behandling av metallnett
Prøver for optisk mikroskopi plasseres på objektglass for observasjon. Men i transmisjonselektronmikroskopi, siden elektroner ikke kan trenge gjennom glassplaten, kan bare nettmateriale brukes som bærer, vanligvis kalt bærenett. Bærenettet kan deles inn i mange forskjellige spesifikasjoner på grunn av forskjellige materialer og former, hvorav * som vanligvis brukes er 200-400-nettet (antall hull) kobbernettet. Kobbernetting bør behandles før bruk for å fjerne smuss på det og holde det rent, ellers vil det påvirke kvaliteten på støttefilmen og klarheten til prøvebildene. Kobbernettet som brukes i dette forsøket er 400 mesh, som kan behandles på følgende måte: først blek det med amylacetat i noen timer, skyll det deretter med destillert vann i flere ganger, og blek det deretter i vannfri etanol for dehydrering. Hvis kobbernettet ved metoden ovenfor fortsatt ikke er rent, kan det brukes til å fortynne konsentrert svovelsyre (1:1) nedsenket i 1 ~ 2 minutter, eller i 1% NaOH-løsning kokt i flere minutter, skylt flere ganger med destillert vann , plassert i vannfri etanoldehydrering, som skal brukes.
2. Utarbeidelse av støttefilm
I prøveobservasjonen bør i bærernettverket også dekkes med et lag ustrukturert, ensartet film, ellers vil små prøver lekke ut av hullene i bærenettverket, dette laget av film kalles vanligvis støttefilmen eller bærefilmen. Bærefilmen bør være gjennomsiktig for elektroner, og dens tykkelse bør generelt være mindre enn 20nm; under påvirkning av elektronstrålen bør filmen også ha en viss grad av mekanisk styrke, kan opprettholde stabiliteten til strukturen og ha god termisk ledningsevne; i tillegg bør støttenettverket ikke ha noen synlig struktur under elektronmikroskopet, og har ikke en kjemisk reaksjon med prøven som bæres, og forstyrrer ikke observasjonen av prøven, og dens tykkelse er vanligvis omtrent 15 nm. Bærefilmen kan være laget av plastfilm (f.eks. brannbomullsfilm, polyetylenformaldehydfilm, etc.), karbonfilm eller metallfilm (f.eks. berylliumfilm osv.). Under rutinemessige arbeidsforhold kan kravene oppfylles med en plastfilm, mens fremstillingen av plastfilmen i brannbomullslimfilmen er relativt enkel, men styrken er ikke like sterk som polyetylenformaldehydfilm.
