Prinsipp og strukturelle egenskaper ved fluorescensmikroskop
Fluorescensmikroskopet bruker et punkt med høy lyseffektivitet for å sende ut lys med en viss bølgelengde (som ultrafiolett lys 3650 eller fiolett-blått lys 4200) gjennom fargefiltersystemet som eksitasjonslys, og eksiterer deretter de fluorescerende stoffene i prøven til å sende ut fluorescens med forskjellige farger, og observerer dem deretter gjennom forsterkningen av objektivlinsen og okularet. På denne måten, under den sterke kontrastbakgrunnen, selv om fluorescensen er veldig svak, er den lett å identifisere og har høy følsomhet. Den brukes hovedsakelig til studiet av cellestruktur og funksjon og kjemisk sammensetning. Den grunnleggende strukturen til fluorescensmikroskop er sammensatt av vanlig optisk mikroskop og noe tilbehør (som fluorescerende lyskilde, eksitasjonsfilter, dikroisk stråledeler og blokkeringsfilter, etc.). Fluorescerende lyskilde —— Ultrahøytrykks kvikksølvlampe (50-200W) brukes vanligvis, som kan avgi lys med forskjellige bølgelengder, men hvert fluorescerende stoff har en eksitasjonslysbølgelengde som produserer den sterkeste fluorescensen, så det er nødvendig å legge til eksitasjonsfiltre (vanligvis ultrafiolette, lilla, blå og grønne eksitasjonsfiltre), slik at bare en viss bølgelengde av eksitasjonslys blir overført til prøven, og alt annet lys absorberes. Etter at hvert stoff er bestrålet med eksitasjonslys, avgir det synlig fluorescens lengre enn bestrålingsbølgelengden på svært kort tid. Fluorescens har spesifisitet, som generelt er svakere enn eksitasjonslys. For å observere den spesifikke fluorescensen, er det nødvendig å blokkere (eller undertrykke) bak objektivlinsen og må brukes sammen.
Forskjellen mellom fluorescensmikroskop og vanlig mikroskop
1. Belysningsmodusen er vanligvis episodisk, det vil si at lyskilden projiseres på prøven gjennom objektivlinsen;
2. Lyskilden er ultrafiolett lys med kort bølgelengde og høyere oppløsning enn vanlig mikroskop;
3. Det er to spesielle filtre, det ene foran lyskilden brukes til å filtrere ut synlig lys, og det mellom okularet og objektivlinsen brukes til å filtrere ut ultrafiolett lys for å beskytte folks øyne.
Fluorescensmikroskop er også et slags optisk mikroskop, hovedforskjellen er at deres eksitasjonsbølgelengder er forskjellige. Dette bestemmer forskjellen mellom fluorescensmikroskop og vanlig optisk mikroskop i struktur og bruk.
Fluorescensmikroskop er det grunnleggende verktøyet for immunfluorescenscytokjemi. Den er sammensatt av lyskilde, filterplatesystem og optisk system. Den bruker lys med en viss bølgelengde for å eksitere prøven for å avgi fluorescens, og forstørrer den gjennom objektivlinsen og okularsystemet for å observere fluorescensbildet til prøven.
