Krav til utarbeidelse av rutineprøver for mikroskopi
Konfokalmikroskop er et epokegjørende høyteknologisk nytt produkt utviklet på 1980-tallet, og det er et av de viktige analytiske instrumentene innen molekylærbiologi og livsvitenskap i dag. Konfokalmikroskopi er basert på fluorescensmikroskopavbildning med en laserskanningsenhet lagt til, ved bruk av en datamaskin for bildebehandling for å få fluorescerende bilder av mikrostrukturen inne i celler eller vev, og for å observere endringer i morfologien til mange fysiologiske signalmaskiner på subcellulært nivå. Bli et kraftig forskningsverktøy innen morfologi, molekylær cellebiologi, nevrovitenskap, farmakologi, genetikk og andre vitenskapelige felt.
Prøveforberedelse for konfokalmikroskopi er et kritisk trinn før deteksjon. Prøver må merkes med fluorescerende prober (enkelt, dobbel, trippel).
de
Prøver kan være faste eller levende vev, eller faste eller levende adherente kulturer. Celler bør dyrkes på Confocal spesielle små kulturretter eller dekkglass. Suspender celler, rist eller slipp skiver, og dekk til med dekkfilm. Zda-tykkelsen på prøven er omtrent 1~2 mm, tykkelsen på dekkglasset som brukes bør være mindre enn 0.17 mm, og tykkelsen på lysbildeglasset bør være mellom 0.8~1.2 mm, og overflaten er glatt, tykkelsen er jevn, og det er ingen åpenbar interferensfluorescens. Monteringsmedium brukes ofte til faste prøver, og glyserol fremstilt i PBS med en pH på 8.5-9 brukes vanligvis til montering.
Rutinemessige krav til prøveforberedelse:
1. Valg av fargestoffer
Siden det konfokale mikroskopet bruker en enkeltbølgelengdelaser som lyskilde, bør valget av fluorescerende fargestoffer være basert på bølgelengden til laseren utstyrt med det konfokale mikroskopet. Hvis det er flere fluorescerende fargestoffer i samme prøve, bør deres emisjonsbølgelengde også vurderes så mye som mulig. Ikke overlapp for å unngå problemer med kryssfarger.
2. Valg av prøvebærer
Generelt er høyeffektobjektivlinsen til konfokalmikroskopet oljelinse, dens numeriske blenderåpning er liten, og arbeidsavstanden mellom linsen og prøven må ikke være mer enn 0.17 mm. Lysbilder og dekkglass er fine. Hvis det er suspenderte celler eller suspenderte partikler, kan en petriskål dedikert til et konfokalt mikroskop brukes til å bære prøven for observasjon.
3. Valg av monteringsmedium
Hvis prøven bare må observeres én gang og fluorescensen ikke er lett å slukke, kan du velge en viss konsentrasjon av glyserolblanding for å forsegle objektglasset. Hvis prøven må plasseres i en periode og tas flere ganger, bør et anti-fluorescens-slukende monteringsmedium velges for å redusere tapet av fluorescerende signaler.
