Struktur og hovedkomponenter i et fluorescensmikroskop
Fluorescensmikroskopi er et viktig verktøy i immunfluorescerende cytokjemi. Den er sammensatt av hovedkomponenter som lyskilde, filterplatesystem og optisk system. Det er å bruke en viss bølgelengde av lys for å eksitere prøven for å avgi fluorescens, og å observere fluorescensbildet til prøven ved å forsterke objektivlinsen og okularsystemet.
Struktur og hovedkomponenter i et fluorescensmikroskop
(1) Lyskilde
I dag brukes ofte 200W ultrahøytrykks kvikksølvlamper som lyskilder. De er laget av kvartsglass, med en sfærisk form i midten, og en viss mengde kvikksølv er fylt på innsiden. Under arbeid fører utladningen mellom de to elektrodene til at kvikksølv fordamper, og lufttrykket i kulen stiger raskt. Når kvikksølvet er fullstendig fordampet, kan det nå 50-70 standard atmosfærisk trykk, og denne prosessen tar vanligvis omtrent 5-15 minutter. Luminescensen til ultrahøytrykkskvikksølvlampen er resultatet av utslipp av lyskvanter under kontinuerlig dissosiasjon og reduksjon av kvikksølvmolekyler ved utladning mellom elektrodene. Den avgir sterkt ultrafiolett og blåfiolett lys, som er nok til å begeistre ulike fluorescerende stoffer, så det er mye brukt i fluorescensmikroskopi.
Ultrahøytrykks kvikksølvlamper avgir også mye varme. Derfor må lampehuset ha gode varmeavledningsforhold, og arbeidsmiljøtemperaturen bør ikke være for høy.
Den nye ultrahøytrykkskvikksølvlampen kan tennes uten høyspenning ved begynnelse av bruk. Etter en tids bruk må den startes på høyspenning (ca. 15000V). Etter oppstart er vedlikeholdsarbeidsspenningen vanligvis 50-60V, og arbeidsstrømmen er omtrent 4A. Gjennomsnittlig levetid for en 200W kvikksølvlampe med ultrahøyt trykk er ca. 200 timer hvis den brukes i 2 timer hver gang. Jo kortere arbeidstid, jo kortere levetid. Hvis den bare brukes i 20 minutter, reduseres levetiden med 50 prosent. Minimer derfor antall starter når du bruker den. Under bruk av pæren reduseres lyseffekten gradvis. Etter at lyset er slukket, vent til det har kjølt seg ned før du starter på nytt. Ikke slå av pæren umiddelbart etter å ha antent den, for ikke å skade elektroden på grunn av ufullstendig kvikksølvfordampning. Vanligvis må den vente i 15 minutter. På grunn av det høye trykket til ultrahøytrykkskvikksølvlampen og de sterke ultrafiolette strålene, må pæren plasseres i lampekammeret før den kan antennes, for ikke å skade øynene og forårsake drift ved eksplosjon .
Kretsen til ultrahøytrykks kvikksølvlampen (100W eller 200W) lyskilde og flere deler inkludert transformator, ballast og start. Det er et system for å justere lysende sentrum av pæren i lampekammeret. En aluminiumsbelagt konkav reflektor er installert bak pæren, og en lyssamlende linse er installert i fronten.
Den innenlandske ultrahøytrykkskvikksølvlampen GCQ-200 har god ytelse og kan erstatte importerte pærer som HBO-200. Gjennomsnittlig levetid er mer enn 200 timer og prisen er relativt lav.
En enkel og bærbar høyfargetemperatur brom wolfram fluorescerende lyskilde utviklet i mitt land har liten størrelse, lav vekt, lav strøm, AC og DC dual-use (med likestrømforsyning), enkel å bære, enkel å bruke og har blitt popularisert og brukt.
(2) Fargefiltersystem
Fargefiltersystemet er en viktig del av fluorescensmikroskopet, som består av en eksitasjonsfilterplate og en pressende filterplate. Filterplatemodellen og navnet på hver produsent er ofte ikke ensartet. Filterplatene er vanligvis oppkalt etter grunnfargen, bokstavene foran representerer fargen, bokstavene bak representerer glasset, og tallene representerer egenskapene til modellen. olympus mikroskop
(3) Objektiv linse
Ulike objektivlinser kan brukes, men akromatiske objektivlinser brukes fordi deres autofluorescens er minimal og deres lystransmisjonsegenskaper (bølgelengdeområde) er egnet for fluorescens. Siden fluorescenslysstyrken til bildet i mikroskopets synsfelt er proporsjonal med kvadratet av blenderåpningsforholdet til objektivlinsen og omvendt proporsjonal med forstørrelsen, for å forbedre lysstyrken til fluorescensbildet, en objektivlinse med stor blenderforhold bør brukes. Spesielt ved høy forstørrelse er effekten veldig tydelig. Derfor, for prøver med utilstrekkelig fluorescens, bør en objektivlinse med et stort blenderforhold brukes med et så lavt okular som mulig (4×, 5×, 6,3×, etc.).
(4) Speil
Det reflekterende laget av reflektoren er generelt aluminiumbelagt, fordi aluminium absorberer mindre i det blåfiolette området av ultrafiolett lys og synlig lys, og refleksjonen er mer enn 90 prosent, mens refleksjonen av sølv er bare 70 prosent. Vanligvis brukes en flat reflektor.
(5) Kondensator
Kondensatorer designet for fluorescensmikroskopi er laget av kvartsglass eller annet UV-transparent glass. Det finnes to typer klarfeltskondensatorer og mørkefeltskondensatorer. Det finnes også fasekontrastfluorescenskonsentratorer.
(6) Epi-light-enhet
Den nye typen epi-lysanordning er at etter at lyset fra lyskilden treffer det interferensspektroskopiske filteret, reflekteres den korte bølgelengdedelen (ultrafiolett og lilla blå) på grunn av egenskapene til belegget på filteret. Når filteret vender mot lyskilden, er vinkelen 45. Når det vippes, skyter det til objektivlinsen vertikalt, og skyter til prøven gjennom objektivlinsen, slik at prøven blir begeistret. På dette tidspunktet fungerer objektivlinsen direkte som en lyssamler. Samtidig er den lange delen av filteret (grønn, gul, rød, etc.) gjennomsiktig for filteret, slik at den ikke reflekteres i retning av objektivlinsen, og filteret fungerer som en eksitasjonsfilterplate, fordi fluorescensen til prøven er i langbølgelengdeområdet for synlig lys, kan passere gjennom filteret og nå okularet for observasjon, øker lysstyrken til det fluorescerende bildet med økningen av forstørrelsen, og er sterkere enn det transmitterte lyset kilde ved høy forstørrelse. I tillegg til funksjonen til en transmisjonslyskilde, er den mer egnet for direkte observasjon av ugjennomsiktige og gjennomskinnelige prøver, slik som tykke skiver, filtermembraner, kolonier og vevskulturprøver. De nye fluorescensmikroskopene som er utviklet de siste årene, bruker stort sett epi-lys-enheter, som kalles epi-fluorescensmikroskoper.
