Prinsippene for fluorescensmikroskopi og laserkonfokalmikroskopi
fluorescensmikroskop
1. Et fluorescensmikroskop er en enhet som bruker ultrafiolett lys som lyskilde for å belyse objektet som testes, slik at det avgir fluorescens, og deretter observere formen og plasseringen til objektet under mikroskopet. Fluorescensmikroskopi brukes til å studere absorpsjon, transport, distribusjon og lokalisering av intracellulære stoffer. Noen stoffer i celler, som klorofyll, kan avgi fluorescens etter å ha blitt utsatt for ultrafiolett stråling; Selv om noen stoffer i seg selv ikke kan avgi fluorescens, kan de også avgi fluorescens etter å ha blitt farget med fluorescerende fargestoffer eller fluorescerende antistoffer og bestrålt med ultrafiolett lys. Fluorescensmikroskopi er et av verktøyene for kvalitativ og kvantitativ forskning på disse stoffene.
2. Prinsippet for fluorescensmikroskop:
(A) Lyskilde: Lyskilden sender ut lys med forskjellige bølgelengder (fra ultrafiolett til infrarødt).
(B) Lyskilde for eksitasjonsfilter: Overfører lys med en bestemt bølgelengde som kan produsere fluorescens i prøven, mens den blokkerer lys som er ubrukelig for eksitasjonsfluorescens.
(C) Fluorescerende prøve: Generelt farget med fluorescerende pigment.
(D) Blokkeringsfilter: overfører selektivt fluorescens ved å blokkere eksitasjon som ikke har blitt absorbert av prøven, og noen bølgelengder overføres også selektivt i fluorescens. Et mikroskop som bruker ultrafiolett lys som lyskilde for å sende ut fluorescens fra bestrålte objekter. Elektronmikroskopet ble først satt sammen av Knorr og Harroska i Berlin, Tyskland i 1931. Denne typen mikroskop bruker høyhastighets elektronstråler i stedet for lysstråler. På grunn av den mye kortere bølgelengden til elektronstrømmen sammenlignet med lysbølger, kan forstørrelsen av elektronmikroskopet nå 800000 ganger, med en minste oppløsningsgrense på 0,2 nanometer. Skanningselektronmikroskopet, som begynte å bruke det i 1963, lar folk se de små strukturene på overflaten av objekter.
3. Anvendelsesomfang: Brukes til å forstørre bilder av små objekter. Vanligvis brukt til observasjon av biologi, medisin, mikroskopiske partikler, etc.
konfokalt mikroskop
1. Et konfokalt mikroskop legger til en semireflekterende halvlinse til den reflekterte lysbanen, som bøyer det reflekterte lyset som allerede har passert gjennom linsen mot andre retninger. Det er en baffel med et nålhull i brennpunktet, og det lille hullet er plassert i brennpunktet. Bak baffelen er et fotomultiplikatorrør. Det kan tenkes at det reflekterte lyset før og etter deteksjonslysfokuspunktet ikke kan fokuseres på det lille hullet gjennom dette konfokale systemet, og vil bli blokkert av ledeplaten. Så det fotometeret måler er intensiteten av reflektert lys i brennpunktet.
2. Prinsipp: Tradisjonelle optiske mikroskoper bruker en feltlyskilde, og bildet av hvert punkt på prøven påvirkes av diffraksjon eller spredt lys fra tilstøtende punkter; Konfokalmikroskopet med laserskanning bruker en punktlyskilde dannet av en laserstråle som passerer gjennom et opplyst nålhull for å skanne hvert punkt i prøvens brennplan. Det opplyste punktet på prøven avbildes ved sondenålhullet, og mottas punkt for punkt eller linje av fotomultiplikatorrøret (PMT) eller termoelektrisk koblingsenhet (cCCD) etter sondenålhullet, og danner raskt et fluorescerende bilde på dataskjermen . Belysningsnålhullet og deteksjonsnålhullet er konjugert i forhold til fokalplanet til objektivlinsen. Punktene på fokalplanet er samtidig fokusert på belysningsnålhullet og emisjonsnålhullet, og punkter utenfor fokalplanet avbildes ikke ved deteksjonsnålhullet. Dette resulterer i et konfokalt bilde som er det optiske tverrsnittet av prøven, og overvinner ulempen med uskarphet i generelle mikroskopbilder.
3. Bruksområder: involverer medisin, dyre- og planteforskning, biokjemi, bakteriologi, cellebiologi, vevsembryologi, matvitenskap, genetikk, farmakologi, fysiologi, optikk, patologi, botanikk, nevrovitenskap, marinbiologi, materialvitenskap, elektronisk vitenskap, mekanikk , petroleumsgeologi og mineralogi.
