Hva er de spesielle strukturelle komponentene til et fluorescerende mikroskop?
Fargefilterblokken er en viktig del av et fluorescensmikroskop, og dens kjernekomponenter består av et første barrierefilter for eksitasjonslys, et andre barrierefilter for emisjonslys og et stråledelingsspeil. Fargefiltermodellene og navnene til ulike produsenter er ofte inkonsekvente.
1. Eksitasjonslysfilter og emisjonslysfilter: Basert på egenskapene til lyskilden og fluorescerende pigment, velges vanligvis følgende tre typer matching for å gi eksitasjonslys innenfor et visst bølgelengdeområde og la fluorescensen som eksiteres av prøven passere gjennom og nå okularet for avbildning.
UV-eksitasjon: Eksitasjonslysfilteret kan tillate UV-lys å passere gjennom og blokkere synlig lys over 400 nm fra å passere gjennom. Det tilsvarende emisjonslysfilteret lar blått lys passere gjennom, og lyset i synsfeltet virker blått, for eksempel når det brukes på DAPI-farging.
Eksitering av blått lys: Eksitasjonslysfilteret kan tillate blått lys å passere gjennom og blokkere lys fra andre bølgelengder. Det tilsvarende emisjonslysfilteret lar grønt lys passere gjennom, for eksempel GFP-fargemarkører.
Eksitering av grønt lys: Eksitasjonslysfilteret lar grønt lys passere og blokkerer lys fra andre bølgelengder. Det tilsvarende emisjonslysfilteret lar vanligvis rødt lys passere gjennom, for eksempel Rhodamine-farging.
2. Semi-transparent og semi-reflekterende fargefilter: Dens funksjon er å fullstendig blokkere eksitasjonslyset fra å passere gjennom og reflektere det; Og sender ut lys innenfor det tilsvarende bølgelengdeområdet. Modellen tilsvarer eksitasjonslysfilteret og emisjonslysfilteret.
(2) Objektivlinse og okular
Ulike objektivlinser kan brukes, men det er best å velge linser med ekstra skala og kromatisk aberrasjonsreduksjon, siden deres selvfluorescens er ekstremt lav og deres lystransmisjonsytelse (bølgelengdeområde) er egnet for fluorescens. På grunn av det faktum at fluorescenslysstyrken til et bilde i mikroskopfeltet er direkte proporsjonal med kvadratet av blenderåpningsforholdet til objektivlinsen og omvendt proporsjonal med forstørrelsen, for å forbedre lysstyrken til fluorescensbilder, bør en objektivlinse med større blenderåpningsforhold brukes. Spesielt for prøver med utilstrekkelig fluorescens bør en objektivlinse med høyt blenderforhold og høy lystransmittans brukes, ledsaget av et okular med lavest mulig forstørrelse.
(3) Andre optiske enheter
Det reflekterende laget av et speil er vanligvis belagt med aluminium fordi aluminium absorberer mindre ultrafiolett og synlig lys i det blå lilla området, og reflekterer over 90 % (mens sølv har en reflektivitet på bare 70 %). Vanligvis brukes flate speil. Fokuseringslinse, spesielt designet og produsert for fluorescensmikroskoper, er laget av kvartsglass eller annet glass som overfører ultrafiolett lys. Den fallende lysanordningen, i tillegg til å ha funksjonen som en transmissiv lyskilde, er mer egnet for direkte observasjon av ugjennomsiktige og halvtransparente prøver, slik som tykke plater, filtermembraner, bakteriekolonier, vevskulturer og andre prøver. De siste årene har mange nye typer fluorescensmikroskop blitt utviklet ved bruk av en fallende lysenhet, kjent som et fallende lysfluorescensmikroskop.
(4) Lyskilde
I dag brukes høytrykkskvikksølvlamper på 50 eller 100W ofte som lyskilder. Under drift skjer det utladning mellom to elektroder, noe som fører til at kvikksølv fordamper og trykket inne i kulen øker raskt (denne prosessen tar vanligvis ca. 5-15 minutter). Under denne prosessen sendes det ut lyskvanter, og bølgelengden til det frigjorte lyset er tilstrekkelig til å eksitere forskjellige fluorescerende stoffer. Derfor er det mye brukt i fluorescensmikroskoper.
Levetiden til kvikksølvlamper er relativt kort, vanligvis 200 timer. Som svar på denne begrensningen i levetid, har en ny type fluorescerende lyskilde X-Cite blitt mye brukt med en superlang pærelevetid på 2000 timer og fleksibel bruk - ingen forvarming nødvendig, klar til bruk.
