Fluorescensmikroskopi Tekniske parametere Fluorescensmikroskopiteknikker og metoder
Tekniske parametere for fluorescensmikroskop 1. Vidvinkelokular 2. Akromatisk objektivlinse 3. Objektivlinsekonverter med fire hull 4. Epi-fluorescerende enhet Blå (B) Grønn (G) eksitasjonssystem 100W kvikksølvlampe 5. Koaksial grov- og finfokusjusteringsmekanisme: justering Fokusområde: 15 mm Mikrobevegelsesgitterverdi: 0,002 mm 6. Dobbeltlags mekanisk bord Lengdegående bevegelsesområde: 70 mm Sidebevegelsesområde: 50 mm
Tekniske parametere for fluorescensmikroskop
1. Vidvinkel okular
2. Akromatisk objektivlinse
3. Nesestykke med fire åpninger
4. Epi-fluorescensenhet blå (B) grønn (G) eksitasjonssystem 100W kvikksølvlampe
5. Koaksial grov- og finfokusjusteringsmekanisme: fokusområde 15 mm finbevegelsesrutenettverdi 0.002 mm
6. Dobbeltlags mekanisk arbeidsbenk
Vertikalt bevegelsesområde: 70 mm Sidebevegelsesområde: 50 mm
Fluorescensmikroskopi ferdigheter og metoder
(1) Glasssklie
Tykkelsen på glassplaten skal være mellom 0,8 og 1,2 mm. Et objektglass som er for tykt vil absorbere mer lys på den ene siden, og på den andre siden kan ikke eksitasjonslyset konsentreres på prøven. Objektglassene må være glatte, jevne i tykkelse og fri for tydelig autofluorescens. Noen ganger brukes glassglass av kvarts.
(2) Dekkglass
Tykkelsen på dekkglasset er omtrent 0.17 mm, glatt. For å styrke eksitasjonslyset kan det også brukes et interferensdekselglass, som er et spesielt dekkglass belagt med flere lag av stoffer (som magnesiumfluorid) som har ulik interferenseffekt på lys med forskjellige bølgelengder, noe som kan gjøre at fluorescens går jevnt. Spennende lys føres gjennom og reflekteres, og dette reflekterte eksitasjonslyset begeistrer prøven.
(3) Prøve
Vevsskiver eller andre prøver bør ikke være for tykke. Hvis den er for tykk, vil mesteparten av eksitasjonslyset bli forbrukt i den nedre delen av prøven, mens den øvre delen som observeres direkte av objektivlinsen ikke vil bli fullstendig eksitert. I tillegg påvirker celleoverlapping eller urenhetsdekning vurderingen.
(4) Monteringsmiddel
Glyserin brukes ofte som monteringsmiddel, som ikke må ha noen autofluorescens, fargeløst og gjennomsiktig, og lysstyrken til fluorescensen er lysere ved pH 8.5-9.5, og det er ikke lett å falme raskt. Derfor brukes en lik blanding av glyserol og 0.5mol/l karbonatbufferløsning med en pH på 9.0 til 9.5 vanligvis som monteringsmiddel.
(5) speilolje
Vanligvis, når du observerer prøver med mørkfelts fluorescensmikroskoper og oljenedsenkningslinser, må du bruke nedsenkingsolje. Det er best å bruke spesiell ikke-fluorescerende nedsenkingsolje. Ovennevnte glyserin kan også brukes i stedet, og flytende parafin kan også brukes, men brytningsindeksen er lav, noe som har en liten innvirkning på bildekvaliteten. Innflytelse.
Prinsippet og de strukturelle egenskapene til fluorescensmikroskop
Fluorescensmikroskopi bruker et punkt med høy lyseffektivitet for å sende ut lys med en viss bølgelengde (som ultrafiolett lys 3650 tommer eller lilla blått lys 4200 tommer) gjennom filtersystemet som eksitasjonslys for å eksitere de fluorescerende stoffene i prøven for å avgi fluorescens av forskjellige farger Etter det, observer gjennom forstørrelsen av objektivlinsen og okularet. På denne måten, under en sterk kontrastbakgrunn, selv om fluorescensen er veldig svak, er den lett å identifisere og har høy følsomhet. Den brukes hovedsakelig til forskning på cellestruktur og funksjon og kjemisk sammensetning. Den grunnleggende strukturen til et fluorescensmikroskop er sammensatt av et vanlig optisk mikroskop pluss noe tilbehør (som en fluorescerende lyskilde, et eksitasjonsfilter, en tofarget stråledeler og et blokkeringsfilter, etc.). Fluorescerende lyskilde – bruk vanligvis ultrahøytrykks kvikksølvlampe (50-200W), som kan sende ut lys med forskjellige bølgelengder, men hvert fluorescerende stoff har en eksitasjonsbølgelengde som produserer den sterkeste fluorescensen, så et eksitasjonsfilter ( Generelt, det er ultrafiolette, lilla, blå og grønne eksitasjonsfiltre), som bare lar eksitasjonslys med en viss bølgelengde passere gjennom og bestråle prøven, mens de absorberer annet lys. Etter at hvert stoff er bestrålet med eksitasjonslys, avgir det synlig fluorescens med lengre bølgelengde enn bestrålingsbølgelengden på svært kort tid. Fluorescens er spesifikk og generelt svakere enn eksitasjonslys. For å observere spesifikk fluorescens, må blokkering (eller undertrykkelse) legges til bak objektivlinsen og brukes sammen med den.
Forskjellen mellom fluorescensmikroskop og vanlig mikroskop
1. Belysningsmetoden er vanligvis episkopisk, det vil si at lyskilden projiseres på prøven gjennom objektivlinsen;
2. Lyskilden er ultrafiolett lys, bølgelengden er kortere, og oppløsningen er høyere enn for vanlige mikroskoper;
3. Det er to spesielle filtre, det ene foran lyskilden brukes til å filtrere bort synlig lys, og det mellom okularet og objektivlinsen brukes til å filtrere ut ultrafiolette stråler for å beskytte det menneskelige øyet.
Fluorescensmikroskop er også et slags optisk mikroskop, hovedforskjellen er at eksitasjonsbølgelengden til de to er forskjellig. Dette bestemmer forskjellen mellom fluorescensmikroskopet og det vanlige optiske mikroskopet når det gjelder struktur og bruk.
Fluorescensmikroskopi er et viktig verktøy i immunfluorescerende cytokjemi. Den er sammensatt av hovedkomponenter som lyskilde, filterplatesystem og optisk system. Det er å bruke en viss bølgelengde av lys for å eksitere prøven for å avgi fluorescens, og å observere fluorescensbildet til prøven ved å forsterke objektivlinsen og okularsystemet.
