Fluorescensmikroskop og vanlig optisk mikroskop forskjeller og egenskaper
Fluorescensmikroskop og vanlig optisk mikroskop er forskjellig, det er ikke gjennom belysning av den vanlige lyskilden å observere prøven, men bruken av en viss bølgelengde av lys (vanligvis ultrafiolett, blåfiolett lys) eksitasjon av fluorescerende materiale i prøven under mikroskopet, slik at fluorescens av fluorescens mikroskop lyskilde ikke spiller en direkte belysning, men som en slags eksitasjon av fluorescerende materiale i prøven av energikilden. Grunnen til at vi kan observere prøven er ikke på grunn av belysningen av lyskilden, men fluorescensfenomenet presentert av det fluorescerende materialet i prøven etter å ha absorbert lysenergien fra eksitasjon. Det kan sees at egenskapene til fluorescensmikroskopet, hovedsakelig lyskilden, kan levere et stort antall spesifikt bølgelengdeområde til eksitasjonslyset, slik at det fluorescerende materialet i den undersøkte prøven kan oppnå den nødvendige intensiteten til eksitasjonslyset. Samtidig skal fluorescensmikroskopet ha et tilsvarende filtersystem. Fluorescensmikroskopet er det grunnleggende verktøyet for fluorescenshistokjemi. Den er sammensatt av ultrahøytrykks lyskilde, filtersystem (inkludert eksitasjons- og undertrykkingsfilterplate), optisk system og fotografisk system og andre hovedkomponenter, er bruken av en viss bølgelengde av lys for å stimulere prøven til å avgi fluorescens.
1. måten fluorescenseksitasjon: i henhold til bølgelengdeområdet for lys er delt inn i UV-eksitasjonsmetode (ved bruk av ultrafiolett belysning) og BV-eksitasjonsmetode (ved bruk av blåfiolett lys) er to typer UV-eksitasjonsmetode kortere enn 400nm nær ultrafiolett lys for eksitasjon. Det er ikke noe synlig eksitasjonslys i denne metoden, så den observerte fluorescensen viser den iboende fluorescensen til fargestoffet, og det er lett å skille den spesifikke fluorescensen på prøven fra selvfluorescensen til bakgrunnsvevet.
2. BV eksitasjonsmetode: Metoden er sentrert på 404nm, 434nm fra ultrafiolett til blått lys for eksitasjon. Denne metoden bruker blått lys for å bestråle prøven, så avskjæringsfilteret til fluorescensobservasjonssystemet må bruke et filter som fullstendig kan blokkere det blå lyset og kan passere den ønskede grønne og gule fluorescensen. Fluorescerende pigmenter for fluorescerende antistoffmetoden. Siden bølgelengden til den maksimale absorpsjonen av eksitasjonslyset og bølgelengden til den maksimale emisjonen av fluorescensen er nær hverandre, må filtrene som brukes i BV-eksitasjonsmetoden være skarpe avskjæringsfiltre. Denne metoden bruker blått lys som eksitasjonslys, slik at absorpsjonseffektiviteten til fluorokromen er høyere og et lysere bilde kan oppnås. Ulempen er at fluorescens under 500 nm ikke kan sees, og over 500 nm ser hele bildet gult ut. I den fluorescerende antistoffmetoden blir det meste av spesifisiteten bedømt av den unike fargen til fluorokromet, så ulempene med BV-eksitasjonsmetoden beskrevet ovenfor har en tendens til å være ekstremt innflytelsesrike når man diskuterer subtil spesifisitet.
