Forberedelse og observasjon av biologiske prøver for elektronmikroskop
Oppløsningen til et mikroskop avhenger av bølgelengden til lyset som brukes. Elektronmikroskopet, som dukket opp i 1933, oppnådde betydelig høyere oppløsning enn et optisk mikroskop på grunn av bruken av elektronstråler med bølgelengder mye kortere enn synlig lys som lyskilder. De forskjellige lyskildene bestemmer også en rekke forskjeller mellom elektronmikroskop og optiske mikroskop.
Basert på forskjellene i prinsippene for elektronstråleavbildning og måtene de virker på prøver, har moderne elektronmikroskop utviklet seg til mange typer. For tiden er de mest brukte transmisjonselektronmikroskoper og skanningselektronmikroskoper. Førstnevnte har en total forstørrelse som kan variere mellom 1000-10000000 ganger, mens sistnevnte har en total forstørrelse som kan variere mellom 20-300000 ganger. Dette eksperimentet introduserer hovedsakelig fremstillingen av to typer mikroskopprøver, transmisjonselektronmikroskopi og skanningselektronmikroskopi.
2, Utstyr
1. Stammen Escherichia coli er tilbøyelig.
2. Løsning eller reagens: pentylacetat, konsentrert svovelsyre, vannfri etanol, sterilt vann, 2 % natriumfosfowolframat (pH 6,5-8,0) vandig løsning, 0,3 % polyvinylformaldehyd (oppløst i kloroform), cytokrom c, 22plasmidacetat, pBR3, ammonium.
3. Instrumenter eller andre verktøy inkluderer vanlige optiske mikroskoper, kobbernett, porselenstrakter, begerglass, petriskåler, sterile dråpere, sterile pinsett, stifter, glassplater, telleplater, vakuumbeleggmaskiner, tørketromler med kritiske punkter, etc.
3, Driftstrinn
(1) Forberedelse og observasjon av prøver for transmisjonselektronmikroskopi
1. Behandling av metallnett
Prøven av et optisk mikroskop plasseres på et objektglass for observasjon. Men i et transmisjonsspeil, siden elektroner ikke kan trenge gjennom glassplaten, kan et nettmateriale bare brukes som bærer, ofte referert til som et bærenett. Bærenettet kan deles inn i forskjellige spesifikasjoner på grunn av forskjellige materialer og former, blant annet brukes kobbernett med 200-400 mesh (antall hull). Kobbernetting bør behandles før bruk for å fjerne smuss og holde det rent, ellers vil det påvirke kvaliteten på støttefilmen og klarheten til prøvebildene. Kobbernettet på 400 mesh som ble brukt i dette forsøket kan behandles ved hjelp av følgende metode: først bløtlegg og flyt med pentylacetat i noen timer, skyll deretter flere ganger med destillert vann, og dypp og flyt til slutt kobbernettet i vannfri etanol for dehydrering. Hvis kobbernettet fortsatt ikke er rent etter metodene ovenfor, kan det bløtlegges i fortynnet konsentrert svovelsyre (1:1) i 1-2 minutter, eller kokes i 1 % NaOH-løsning i noen minutter, skylles flere ganger med destillert vann, og deretter dehydreres i vannfri etanol for senere bruk.
