Krav til klargjøring av fluorescerende objektglass
(1) Glasssklie
Tykkelsen på lysbildet skal være mellom 0,8 og 1,2 mm. Hvis objektglasset er for tykt, vil det på den ene siden absorbere mer lys, og på den annen side vil det ikke la eksitasjonslyset samle seg på prøven. Glassglasset må være glatt, jevn i tykkelse og ikke ha noen åpenbar spontan fluorescens. Noen ganger er det nødvendig med glassglass av kvarts.
(2) Dekkglassglass
Tykkelsen på dekkglasset er omtrent 0.17 mm, og det er glatt. For å forbedre eksitasjonslyset kan interferensdekselglass også brukes. Dette er et spesialdesignet dekkglass med flere lag med stoffer (som magnesiumfluorid) som har ulik interferenseffekt på lys med ulike bølgelengder. Det kan tillate fluorescens å passere jevnt, mens refleksjonseksitasjonslys kan begeistre prøven.
(3) Prøve
Vevsskiver eller andre prøver bør ikke være for tykke. Hvis de er for tykke, forbrukes mesteparten av eksitasjonslyset i den nedre delen av prøven, mens den øvre delen som observeres direkte av objektivlinsen ikke er helt eksitert. I tillegg kan celleoverlapping eller urenhetsmaskering påvirke dømmekraften.
(4) Tetningsmiddel
Glyserin brukes ofte som monteringsmiddel, som ikke må ha spontan fluorescens, fargeløst og gjennomsiktig. Fluorescenslysstyrken er relativt lyssterk ved pH 8.5-9.5 og er ikke lett å visne bort raskt. Derfor brukes en lik blanding av glyserol og 0.5mol/L karbonatbuffer med pH 9.0-9.5 vanligvis som tetningsmiddel.
(5) Speil olje
Når du bruker et mørkt felt fluorescensmikroskop og et oljemikroskop for å observere prøver, må speilolje brukes. Spesiell ikke-fluorescerende speilolje kan brukes, eller glyserol kan brukes som erstatning. Flytende parafin kan også brukes, men brytningsindeksen er lav og har en liten innvirkning på bildekvaliteten.
