Fargeteknikker og mikroskopisk observasjon av mikroorganismer
1. Formål
1.1 Lær de grunnleggende teknikkene for mikrobielle utstryk og farging.
1.2 Mestre den enkle fargingsmetoden for bakterier.
1.3 Foreløpig forstå de morfologiske egenskapene til bakterier, og konsolidere kunnskapen om hvordan man bruker oljelinser og aseptiske operasjonsteknikker.
2 Prinsipper
Utsmøring og farging av bakterier er en grunnleggende teknikk i mikrobiologiske eksperimenter. Bakterieceller er små og gjennomsiktige, noe som gjør dem vanskelige å identifisere under et vanlig lysmikroskop; de må være flekkete. Et enkelt fargestoff brukes til å farge bakterier, slik at de fargede bakteriene danner en tydelig fargeforskjell fra bakgrunnen, slik at deres morfologi og struktur kan observeres tydeligere. Denne metoden er enkel å betjene og egnet for å observere den generelle formen til bakterieceller og bakteriearrangementet. Grunnleggende fargestoffer brukes ofte til enkel farging. Dette er fordi i nøytrale, alkaliske eller svakt sure løsninger er bakterieceller vanligvis negativt ladet, og når basiske fargestoffer ioniseres, er fargedelen av molekylene deres positivt ladet, så de er alkaliske. Den fargede delen av fargestoffet kombineres lett med bakterier for å farge dem. De fargede bakteriecellene står i skarp kontrast til bakgrunnen, noe som gjør dem lettere å identifisere under et mikroskop. Fargestoffer som vanligvis brukes til enkel farging inkluderer metylenblått, krystallfiolett, basisk fuksin, etc. Når bakterier bryter ned sukker og produserer syre, noe som fører til at pH i kulturmediet synker, øker den positive ladningen på bakteriene. På dette tidspunktet kan sure fargestoffer som eosin, sur fuchsin eller kongorødt brukes til farging. Bakterier må fikses før farging. Den har to formål: den ene er å drepe bakterier og få dem til å feste seg til glassplaten; den andre er å øke deres affinitet for fargestoffer. To ofte brukte metoder er oppvarming og kjemisk fiksering. Når du fikser, prøv å opprettholde den opprinnelige formen til cellene.
3 materialer
3.1 Bakterier: Bacillus subtilis 12-18h næringsagar skråkultur, Staphylococcus aureus 24 timers næringsagar skråkultur, Escherichia coli 24 timers næringsagar skråkultur, bakegjæragar skråkultur.
3.2 Fargemiddel: Lus alkaliske metylenblått fargestoff (eller ammoniumoksalat krystallfiolett fargestoff), karbolsyrefuksinfargestoff.
3.3 Instrumenter eller andre redskaper: mikroskop, alkohollampe, lysbilde, inokulasjonssløyfe, objektglasstativ, dobbeltlags flaske (inneholder sedertreolje og xylen), linsevev, fysiologisk saltvann eller destillert vann, etc.
4. Prosess: smøre → tørking → fiksering → farging → vasking → tørking → mikroskopisk undersøkelse.
5 trinn
5.1 Utstryk: Ta to rene og oljefrie glassglass. Under sterile forhold, legg en liten dråpe vanlig saltvann (eller destillert vann) på hvert senter av glassplaten. Bruk en inokulasjonsløkke for å sterilisere bakteriene fra Bacillus subtilis. , Micrococcus luteus og Escherichia coli, plukk en liten bakterieplen i vanndråpene på skrå, bland godt og påfør det i en tynn film. Hvis du bruker en bakteriesuspensjon (eller flytende kultur) smøre, kan du bruke en inokuleringsløkke til å plukke 2 til 3 løkker og påføre dem direkte på objektglasset. Vær forsiktig så du ikke slipper for mye fysiologisk saltvann (destillert vann) og fjern bakterier og påfør det jevnt og ikke for tykt.
5.2 Tørking Tørk naturlig ved romtemperatur. Du kan også varme den litt over en alkohollampe med den belagte siden opp for å tørke den. Men pass på at du ikke kommer for nær flammen, da for høy temperatur vil ødelegge bakterienes morfologi.
5.3 Fiksering Hvis det brukes oppvarmet tørking, kombineres fiksering og tørking i ett trinn, og metoden er den samme som tørking. Smør, tørk og varmefiks.
5.4 Farging: Plasser objektglasset flatt på objektglassstativet, og tilsett 1 til 2 dråper fargeløsning på smøret (det er hensiktsmessig at fargeløsningen akkurat dekker smørefilmen). Farg med Lus basiske metylenblått i 1 til 2 minutter, og farg med karbolsyrefuksin (eller ammoniumoksalat krystallfiolett) i ca. 1 minutt.
5.5 Vask med vann: Hell av fargeløsningen og skyll forsiktig med vann fra springen fra den ene enden av objektglasset til vannet som renner ned fra smøret er fargeløst. Når du vasker med vann, må du ikke vaske den belagte overflaten direkte med vann. Vannstrømmen bør ikke være for rask eller for stor for å hindre at smørefilmen faller av.
5.6 Tørking: Rist av vanndråpene på objektglasset og tørk naturlig, føn med hårføner eller absorber det med absorberende papir (pass på så du ikke tørker av bakteriene). 5.7 Mikroskopisk undersøkelse Etter at utstryket er tørt, utfør mikroskopisk undersøkelse. Utstryket må være helt tørt før det kan ses med en oljelinse.
6 Resultater Tegn morfologien til E. coli og Micrococcus luteus observert etter enkeltfarging.
