To ofte brukte mikroskopiske observasjonsmetoder
1, Mørkefeltobservasjon
Mørkt synsfelt er faktisk mørkfeltbelysning Dens egenskaper er forskjellige fra lyst synsfelt, siden det ikke direkte observerer det lysende lyset, men heller observerer det reflekterte eller diffrakterte lyset til objektet som inspiseres. Derfor blir synsfeltet en mørk bakgrunn, mens objektet som inspiseres gir et lyst bilde
Prinsippet om mørkt felt er basert på det optiske Tyndall-fenomenet, der støvpartikler ikke kan observeres av det menneskelige øyet når de utsettes for sterkt lys på grunn av diffraksjon forårsaket av sterkt lys. Hvis lyset projiseres på skrå på det, ser partiklene ut til å øke i volum på grunn av lysrefleksjon, noe som gjør dem synlige for det menneskelige øyet.
Spesialtilbehøret som kreves for observasjon av mørke felt er en spotlight i mørkt felt. Dets karakteristiske trekk er at den ikke lar lysstrålen passere gjennom objektet fra bunn til topp, men endrer banen til lyset slik at det rettes skrått mot objektet, slik at belysningslyset ikke kommer direkte inn i objektivlinsen, og bruker det lyse bildet som dannes av refleksjon eller diffraksjon av lyset som er på overflaten av det mørke objektet som er observert i mye høyere oppløsning enn det observerte feltet. feltobservasjon, og når opp til 0,02-0,004
2, fasekontrast speil inspeksjon metode
Den vellykkede oppfinnelsen av fasekontrastmikroskopi i utviklingen av optiske mikroskoper er en viktig prestasjon innen moderne mikroskopiteknologi. Vi vet at det menneskelige øyet bare kan skille bølgelengden (fargen) og amplituden (lysstyrken) til lysbølger. For fargeløse og transparente biologiske prøver, når lys passerer gjennom, endres ikke bølgelengden og amplituden mye, noe som gjør det vanskelig å observere prøven i et lyst felt
Fasekontrastmikroskopet bruker forskjellen i optisk banelengde til objektet som inspiseres for speilinspeksjon, og utnytter effektivt interferensfenomenet lys for å transformere faseforskjellen som ikke kan skilles fra det menneskelige øyet til en forskjellig amplitudeforskjell. Selv fargeløse og gjennomsiktige stoffer kan bli tydelig synlige Dette letter observasjonen av levende celler, derfor er fasekontrastmikroskopi mye brukt i inverterte mikroskoper
Det grunnleggende prinsippet for fasekontrastmikroskopi er å konvertere den optiske veiforskjellen til synlig lys som passerer gjennom prøven til amplitudeforskjell, og dermed forbedre kontrasten mellom ulike strukturer og gjøre dem klare og synlige Etter å ha passert gjennom prøven, gjennomgår lyset brytning, avviker fra den opprinnelige optiske banen og blir forsinket med 1/4 λ (bølgelengde). Hvis den optiske veiforskjellen økes eller reduseres med ytterligere 1/4 λ, blir den optiske veiforskjellen 1/2 λ, og interferensen mellom de to lysstrålene øker eller reduseres etter at aksen er kombinert, og forbedrer kontrasten Når det gjelder struktur, har fasekontrastmikroskoper to
spesielle forskjeller fra vanlige optiske mikroskoper:
1. En ringformet membran er plassert mellom lyskilden og kondensatoren, og dens funksjon er å danne en hul lyskjegle som passerer gjennom kondensatoren og fokuserer på prøven
2. Vinkelfaseplate: En faseplate belagt med magnesiumfluorid tilsettes objektivlinsen, som kan forsinke fasen av direkte eller diffraktert lys med 1/4 λ. Det kan deles inn i to typer:
(1) . A+faseplate: Forsink det direkte lyset med 1/4 λ, og legg til de to settene med lysbølger etter å ha kombinert aksene. Amplituden øker, og prøvestrukturen blir lysere enn det omgivende mediet, og danner en lys kontrast (eller negativ kontrast)
(2) . B+faseplate: Forsink det diffrakterte lyset med 1/4 λ, og trekk fra lysbølgene etter å ha kombinert aksene til to sett med lysstråler, noe som resulterer i en reduksjon i amplitude og danner en mørk kontrast (eller positiv kontrast). Strukturen blir mørkere enn det omkringliggende mediet
